Содержание

1.13 Узнавание фигур

1.13. Методика «Узнавание фигур».

Методика направлена на исследование особенностей зрительного запоминания.

Область применения: исследование особенностей зрительного запоминания, разработка рекомендаций.

Психолог использует наглядный материал, подготовленный для данной методики, и в течение 10 секунд показывает его ребёнку. Затем ему немедленно предъявляют другой рисунок, где виденные им 9 фигур разбросаны среди других двадцати пяти. Ребёнок должен найти те фигуры, которые он видел в первом случае.

Коррелирует при использовании батареи тестов: 1.1, 1.2, 1.3, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 10, 1.11, 1.12, 1.14, 1.16, 1.17, 1.20.

Инструкция.

«Посмотри внимательно на рисунок. На нём изображены различные фигуры. Постарайся их запомнить».

«Перед тобой рисунок, на котором изображено 25 разных фигур. Найди среди них только те, которые нужно было запомнить».

Обработка и интерпретация данных.

Психолог отмечает и подсчитывает число правильно и неправильно узнанных фигур. Для того чтобы охарактеризовать уровень узнавания, подсчитывается коэффициент узнавания Е.

Е = М : 9 + N,

Где М – число правильно узнанных фигур,

N – число неправильно узнанных фигур.

Наиболее оптимальный коэффициент узнавания равен 1, поэтому чем ближе результаты конкретного ребёнка к 1, тем лучше функционируют у него процессы узнавания наглядного материала. Аналогичным образом можно исследовать процессы узнавания другого материала (например, буквенного, цифрового, словесного).

Методика «Узнай фигуры»

Эта методика — на узнавание. Данный вид памяти появляется и развивается у детей в онтогенезе одним из первых. От развитости данного вида существенно зависит становление других видов памяти, в том числе запоминания, сохранения и воспроизведения.

В методике детям предлагаются картинки в сопровождении следующей инструкции:

«Перед вами 5 картинок, расположенных рядами. Картинка слева отделена от остальных двойной вертикальной чертой и похожа на одну из четырех картинок, расположенных в ряд справа от нее. Необходимо как можно быстрее найти и указать на похожую картинку».

Сначала для пробы ребенку предлагают решить эту задачу на картинках, изображенных в ряду под номером 0, затем — после того, как экспериментатор убедился в том, что ребенок все понял правильно, предоставляют возможность решить эту задачу на картинках с номерами от 1 до 10.

Эксперимент проводится до тех пор, пока ребенок не решит все 10 задач, но не больше чем 1,5 мин даже в том случае, если ребенок к этому времени не справился со всеми задачами.

 

Оценка результатов

10 баллов — ребенок справился со всеми задачами меньше, чем за 45 сек.

8-9 баллов — ребенок справился со всеми задачами за время от 45 до 50 сек.

6-7 баллов — ребенок справился со всеми предложенными задачами в течение периода времени от 50 до 60 сек.

4-5 баллов — ребенок справился со всеми задачами за время от 60 до 70 сек.

2-3 балла — ребенок решил все задачи за время от 70 до 80 сек.

0-1 балл — ребенок решил все задачи, затратив на это более чем 80 сек.

Выводы об уровне развития

10 баллов — очень высокий.

8-9 баллов — высокий.

4-7 баллов — средний.

2-3 балла — низкий.

0-1 балл — очень низкий.

 


См. также

Тесты для детей Тесты способностей

 


   RSS     [email protected] 

УЗНАВАНИЕ ФИГУР — Стребелева и Мишина


Подборка по базе: Практическая работа №3. Примерная рабочая программа по русскому , МИНОБРНАУКИ РОССИИ федеральное государственное бюджетное образов, дополнительная общеразвивающая программа.doc, рабочая программа кружка.doc, рабочая программа работа с текстом 3 класс.pdf, Урок Вода в России.doc, Уровневая раб. программа по технологии 5-9 класс 2020.doc, Лекции Русский язык и культура речи.docx, Рабочая программа по МАТЕМАТИКА профиль 10-11 КЛАССЫ.docx, рабочая программа 5 класс Красиков.docx

10. УЗНАВАНИЕ ФИГУР (тест Бернштейна). Задание на­правлено на проверку уровня развития памяти.

Оборудование: 2 таблицы с геометрическими фигурами.

Наглядный материал: набор № 1, рис. 76, 77.

Проведение обследования: ребенку предлагают • таблицу с геометрическими фигурами, время показа 10 секунд. Ему говорят: «Запомни эти фигуры». После показа пер­вой таблицы ребенку предъявляют другую, на которой фигуры-эталоны разбросаны среди множества разных фи­гур. Его просят найти среди них те геометрические фигу­ры, которые он видел в первой таблице.

Оценка действий ребенка: очень высокий результат — девять фигур узнаны верно, норма — семь-восемь фигур, низкий результат — шесть фигур, очень низкий — мень­ше шести фигур.

Результаты проведенного обследования оцениваются в баллах. 1. СЛОЖИ.

1 балл — ребенок не понимает цель; в условиях обу­чения действует неадекватно.

2 балла — ребенок принимает задание, но складыва­ет картинку, не ориентируясь на целостность изображе­ния даже после показа образца.

3 балла — ребенок принимает и понимает условия задания; выполняет задание с помощью; ориентируется на образец — целую картинку; после обучения задание выполняет, пользуясь практическим примериванием.

4 балла — ребенок принимает и понимает условия задания; самостоятельно выполняет задание, пользуясь различными типами ориентировки.

2. ПРЕДСТАВЛЕНИЯ ОБ ОКРУЖАЮЩЕМ.

1 балл — ребенок не вступает в речевое общение; кон­такт и сотрудничество с незнакомым взрослым устанавли­вается на эмоциональном и деловом уровне.

2 балла — ребенок принимает задание; вступает в речевой контакт, однако ответы оказываются неадекват­ными поставленным вопросам.

3 балла — ребенок принимает и понимает задание; отвечает с помощью дополнительных, уточняющих вопро­сов, демонстрируя недостаточный уровень сформированно-сти представлений об окружающем.

4 балла — ребенок принимает и понимает задание; с интересом отвечает на поставленные вопросы, демонстри­руя сформированность представлений об окружающем.

3. ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О ВРЕМЕНАХ ГОДА.

1 балл — ребенок не понимает задание; в условиях обучения действует неадекватно.

2 балла — ребенок принимает задание, но не пони­мает его условий; раскладывает картинки без учета по­следовательности времен года.

3 балла — ребенок принимает и понимает задание, но самостоятельно выполнить сразу не может; после обу­чения задание выполняет.

4 балла — ребенок принимает и понимает задание; выполняет задание самостоятельно; сформированы пред­ставления о временах года и их последовательности.

4. КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ И СЧЕТ.

1 балл — ребенок не понимает цель; в условиях обу­чения действует неадекватно.

2 балла — ребенок принимает задание; количествен­ные представления сформированы в пределах трех; реше­ние устных задач недоступно.

3 балла — ребенок принимает и понимает задание; количественные представления только в пределах пяти; устные задачи выполняет только в пределах трех.

4 балла — ребенок принимает и понимает задание; все виды заданий выполняет правильно. 5. РАССКАЖИ.

1 балл — ребенок не принимает задание; в условиях обучения действует неадекватно.

2 балла — ребенок принимает задание; раскладывает картинки, не ориентируясь на последовательность событий; после оказания помощи не объединяет их в общий сюжет.

3 балла — ребенок задание принимает; раскладывает картинки с учетом последовательности событий; в некото­рых случаях требуется только первый вид помощи, но са­мостоятельно рассказать о действиях не может.

4 балла — ребенок задание принимает; самостоятель­но раскладывает картинки с учетом последовательности событий и составляет рассказ.

6. ДОРИСУЙ.

1 балл — ребенок не принимает и не понимает усло­вия задания; после обучения действует неадекватно.

2 балла — ребенок принимает задание, но условия задания не понимает.

3 балла — ребенок принимает и понимает цель зада­ния; может нарисовать три или четыре предмета.

4 балла — ребенок принимает и понимает цель зада­ния; рисует шесть предметов.
7. РАССКАЖИ.

1 балл — ребенок не понимает цель задания; в усло­виях обучения действует неадекватно.

2 балла — ребенок принимает задание; перечисляет предметы и объекты, изображенные на. картинке, однако не понимает динамики события; на уточняющие вопросы отвечает неадекватно; основной сюжет изображенного со­бытия не понимает.

3 балла — ребенок принимает задание, но без помо­щи не может воспринять целостную ситуацию, изобра­женную на картинке; после уточняющих вопросов отве­чает правильно, но самостоятельно составить рассказ не может.

4 балла — ребенок принимает задание и понимает целостность ситуации, изображенной на картинке; сам со­ставляет рассказ.

8. ЗВУКОВОЙ АНАЛИЗ СЛОВА.

1 балл — ребенок не принимает и не понимает усло­вия задания.

2 балла — ребенок принимает задание, но условия задания не понимает; ответы носят неадекватный харак­тер; в условиях обучения отвечает адекватно, но после обучения самостоятельно с заданием не справляется.

3 балла — ребенок принимает и понимает условия задания; самостоятельно задание выполняет только после обучения.

4 балла — ребенок принимает и понимает условия задания; самостоятельно справляется с его выполнением. 9. ПРОДОЛЖИ РЯД.

1 балл — ребенок не принимает задание; в условиях обучения действует неадекватно.

2 балла — ребенок принимает задание, однако не мо­жет написать по образцу; пишет только некоторые эле­менты образцов, не учитывая их последовательности, не соблюдая строчки.

3 балла — ребенок принимает и понимает условия задания; может написать некоторые образцы, однако прин­цип чередования элементов при написании не учитывает.

4 балла — ребенок принимает и понимает условия задания; справляется с заданием без ошибок. 10. УЗНАВАНИЕ ФИГУР.

1 балл — ребенок не принимает задание.

2 балла — ребенок принимает задание, однако мо­жет опознать в другой таблице не более двух-трех фигур.

3 балла — ребенок принимает и понимает задание; может опознать четыре-пять фигур.

4 балла — ребенок принимает и понимает задание; узнает семь — девять фигур в другой таблице.

РЕЗУЛЬТАТЫ ПСИХОЛОГО-ПЕДАГОГИЧЕСКОГО

ОБСЛЕДОВАНИЯ ДЕТЕЙ ДОШКОЛЬНОГО ВОЗРАСТА 5-7 ЛЕТ

Многолетний опыт работы по психолого-педагогическо­му изучению детей дошкольного возраста с использовани­ем представленных методик свидетельствует, что показа­телями умственного развития ребенка являются общие интеллектуальные умения: принятие задания, понимание условий этого задания, способы выполнения — пользует­ся ли ребенок практической ориентировкой (методом проб, практическим примериванием или зрительной ориентиров­кой), обучаемость в процессе диагностического обследова­ния, интерес к познавательным задачам, к продуктивным видам деятельности и отношение к результату своей дея­тельности.

В соответствии с этими показателями и количеством баллов можно условно отнести обследуемых детей к сле­дующим группам:

Первую группу (10—12 баллов) составляют дети, кото­рые не проявляют интереса к заданиям, с трудом вклю­чаются в совместную деятельность со взрослым, не реша­ют познавательных задач, а в условиях обучения действуют неадекватно. Собственная их речь характеризуется нали­чием отдельных слов или элементарной фразы.

Анализ показателей этой группы детей говорит о глу­боком недоразвитии их познавательной деятельности.

В целях определения потенциальных возможностей раз­вития этих детей и составления индивидуальных программ обучения обследование необходимо проводить с использо­ванием методов и методик диагностики раннего возраста.

Во вторую группу (13—23 балла) входят дети, которые эмоционально реагируют на игрушки, включаются в сов­местные действия со взрослым.

В процессе самостоятельного выполнения познаватель­ных задач у них отмечаются в основном нерезультатив­ные действия, в условиях обучения действуют адекватно, но после обучения не переходят к самостоятельному вы­полнению задания. У них не сформированы продуктив­ные виды деятельности и умение работать по образцу. Речь этих детей характеризуется отдельными словами, элементарной фразой, отмечаются грубые нарушения грам­матического строя, слоговой структуры слова и звукопро-изношения.


113


Показатели обследования этой группы детей говорят о значительном недоразвитии познавательной деятельности. Эти дети также нуждаются в комплексном обследовании с использованием клинических методов. В дальнейшем с

ними необходимо организовать целенаправленную коррек-ционно-воспитательную работу.

Третью группу (24—33 балла) составляют дети, кото­рые заинтересованы в действиях с игрушками и могут выполнить самостоятельно некоторые предложенные за­дания.

В процессе выполнения познавательных задач они прит меняют в основном практическую ориентировку — пере­бор вариантов, а после диагностического обучения исполь­зуют метод проб. У этих детей отмечается интерес к продуктивным видам деятельности, таким, как конструи­рование, рисование.

Самостоятельно выполнить некоторые задания они мо­гут только после диагностического обучения. У них, как правило, имеется собственная фразовая речь с аграмма-тизмом. Эта группа детей нуждается в тщательном обследовании слуха, зрения и речи. В зависимости от пер­вичного нарушения строится система коррекционно-воспи-тательной работы.

Четвертую группу (34—40 баллов) составляют дети, у которых отмечается интерес к познавательным задачам. При их выполнении они пользуются в основном зритель­ной ориентировкой. У них отмечается стойкий интерес к продуктивным видам деятельности, они самостоятельно справляются с предложенными заданиями. Речь у этих детей фразовая, грамматически правильно построенная. Они достигают хорошего уровня познавательного разви­тия и имеют сформированные предпосылки к учебной де­ятельности.

Результаты психолого-педагогического обследования по­дробно фиксируются в протоколе обследования познава­тельного развития детей дошкольного возраста (см. При­ложение 1.1). Кроме того, эти результаты можно представить в виде таблиц (см. табл. 11, 12).

Таблица 11

Результаты обследования детей 5—6 лет



Наименование задания

Оценка в баллах по группам

п/п

Первая группа

Вторая группа

Третья группа

Четвертая группа

1

Включение в ряд

1

2

3

4

2

Коробка форм

1

2

3

4

3

Построй из палочек

1

2

4

4

Продолжение

№ п/п

Наименование задания

Оценка в баллах по группам

Первая группа


Вторая группа

Третья группа

Четвертая группа

4

Сложи разрез­ную картинку

1

2

3

4

5

Сгруппируй картинки

1

2

3

4

6

Количественные представления и счет

1

2

3

3

7

Сравни

1

2

2

4

8

Найди время года

1

2

3

4

9

Нарисуй целое

1

2

3

4

10

Расскажи

1

2

2

3

Общий балл

10

20

29

38

Таблица 12

Результаты обследования детей 6—7 лет


№ п/п

Наименование задания

Оценка в баллах по группам

Первая группа


Вторая группа

Третья группа

Четвертая группа

1

Сложи разрезную картинку

1

2

3

4

2

Представления об окружающем

1

2

3

4

3

Представления о временах года

1

2

3

4

4

Количественные представления и счет

1

2

3

3

5

Расскажи

1

2

3

4

Продолжение

.№

п/п


Наименование задания

Оценка в баллах по группам

Первая

группа


Вторая группа

. Третья группа

Четвертая группа

6

Дорисуй

1

2

3

3 Р

7

Расскажи

1

2

2

4

8

Звуковой анализ слова

1

2

3

4

9

Продолжи ряд

1

2

3

3

10

Узнавание фигур

1

3

2

3

Общий балл

10

21

28

36

чайка

волк

чижик

чашка

час

урок

птичка

сеть

час

чижик

чай

ухо

мыло

кисть

урок

Список 6

Список 7

Список 8

Список 9

Список 10

дым часы

урок

волк


чай

город


шишка мыло

чижик бык

чашка

птичка

окно

сеть

часы

шишка

город

спичка

урок

мыло

кисть

спичка мыло


чай часы море

дом Вова

рыба


чайка щи ворон

окно зайчик гром

окно гром рыба

ухо щи шашка

кисть часы зайчик

дым море часы

город Саша час

ОБСЛЕДОВАНИЕ РЕЧЕВОГО РАЗВИТИЯ ДЕТЕЙ 5-6 ЛЕТ

Страница не найдена | Мир дошколят

Упс… Ошибка 404

Извините, но страница, которую Вы ищете, не существует.

Вы можете перейти на ГЛАВНАЯ СТРАНИЦА
НАШИ ПОСЛЕДНИЕ ПОСТЫ

Камни «Марблс» инновационный прием в работе педагогов ДОУ с детьми дошкольного возраста для их…

Главный редактор — 0

Базарова Татьяна Михайловна, педагог-психолог Хоменко Лилия Анатольевна, воспитатель МАДОУ ДС № 69 «Ладушки» г. Старый Оскол, Белгородская область   Материал участников  Второго межрегионального Фестиваля мастер-классов среди педагогических работников дошкольных образовательных учреждений «Творческой мысли каскад» – 2022 год Мастер-класс для педагогов Презентация…

Подробнее

Играйте, развлекайтесь, познавайте

Главный редактор — 0

Циценко Валентина Семеновна Красноперова Татьяна Николаевна воспитатели МБДОУ ДС №64 «Искорка» г.Старый Оскол, Белгородская область Материал участников  Второго межрегионального Фестиваля мастер-классов среди педагогических работников дошкольных образовательных учреждений «Творческой мысли каскад» – 2022 год Мастер-класс для родителей   Пояснительная…

Подробнее

Необычное использование обычных предметов в социально-коммуникативном развитии дошкольников

Главный редактор — 0

Филинова Галина Викторовна Балаева Елена Алексеевна воспитатели МДОУ-детский сад № 9, г. Котово Волгоградской области Материал участников  Второго межрегионального Фестиваля мастер-классов среди педагогических работников дошкольных образовательных учреждений «Творческой мысли каскад» – 2022 год Мастер-класс для…

Подробнее

Веточка герани

Главный редактор — 0

Бурнашева Ольга Анатольевна Воспитатель МБДОУ «Обуховский ДС «Земляничка» Старооскольского городского округа Материал участников  Второго межрегионального Фестиваля мастер-классов среди педагогических работников дошкольных образовательных учреждений «Творческой мысли каскад» – 2022 год Мастер-класс для педагогов         Просим прокомментировать материал – через…

Подробнее

Развитие способности к толерантности у педагогов ДОУ

Главный редактор — 0

Котенко Светлана Вячеславна, старший воспитатель Матвеенко Елена Анатольевна воспитатель МДОУ-детский сад № 9, г. Котово Волгоградской области Материал участников  Второго межрегионального Фестиваля мастер-классов среди педагогических работников дошкольных образовательных учреждений «Творческой мысли каскад» – 2022 год Мастер-класс для…

Подробнее

Творческой мысли каскад-22 – материалы участников мероприятия

Главный редактор — 0

На странице представлены ссылки на материалы участников  Второго межрегионального Фестиваля мастер-классов среди педагогических работников дошкольных образовательных учреждений «Творческой мысли каскад» — 2022 год   ВСЕ материалы будут ПРИНИМАТЬСЯ до 10 апреля!!!  Просим всех, кому…

Подробнее

Психолог, нейропсихолог Наталья Наумова

Семейный психотерапевт (психолог), детский психолог, детский нейропсихолог НАТАЛЬЯ НАУМОВА

Сертифицированный специалист факультета психологии МГУ им Ломоносова с опытом работы более 15 лет, с детьми, взрослыми и семьями.

Действительный член Национальной саморегулируемой организации «Союз психотерапевтов и психологов» 

Постоянный автор раздела «Психология» в  журнале «Счастливые родители». 

Психолог-эксперт СМИ, участница теле- и радиоэфиров, ведущая ютьюб канала о вопросах психологии, автор более 150 научных и научно-популярных статей о психологии.

Образование основное:

  • Институт психоанализа (психолог, психолог-консультант, семейный психотерапевт),
  • МГУ им Ломоносова (детский нейропсихолог). 

Предоставляемые услуги:

Психологическая помощь детям:

  • Помощь во взаимоотношениях с детьми и взрослыми;
  • Помощь при выходе из критической ситуации;
  • Преодоление детских страхов;
  • Помощь при поведенческих трудностях, если ребенок непослушный или  неуправляемый;
  • Помощь в случае, если ребенок обидчив и раним;
  • Помощь в случае, если ребенок не хочет учиться.

Нейропсихологическая помощь:

  •  Помощь истощаемым, быстро устающим детям. Улучшаем умственную активность;
  • Помощь детям с проблемами внимания, памяти, мышления. Улучшаем процессы внимания, мышления, памяти;
  • Помогаем ребенку стать успешным в учебе;
  • Помогаем ребенку научиться управлять своими эмоциями, контролировать себя и свои действия;
  • Помощь несамостоятельным детям;
  • Помощь детям с особыми возможностями здоровья;
  • Помощь детям с синдромом дефицита внимания и гиперактивности;
  • Готовим ребенка к успешному обучению в школе.

Семейная психотерапия:

  • помощь семье в период кризиса, развода;
  • помощь маме принять и полюбить своего ребенка;
  • помощь выстроить в семье теплые, доверительные отношения с супругом и детьми;
  • разрешение конфликтов супругов и налаживание конструктивных взаимоотношений.

Психологическая помощь взрослым:

  • Помощь в постановке и достижении целей;
  • Помощь в осознании и контроле за своими мыслями и чувствами;
  • Помощь в принятии серьезных решений;
  • Помощь при психологическом бесплодии;
  • Помощь в преодолении панических атак;
  • Помощь при сложностях построения надежных взаимоотношений супругов, вступления в брак;
  • Решение личностных проблем: преодоление страхов, зависимостей, стеснительности и неуверенности.

Методика узнавания фигур а н бернштейна. Тестируем логику детей с помощью методики А.Н

Важная характеристика зрелой личности — умение выстраивать логику событий. Формирование этого навыка начинается в раннем возрасте и необходимо для успешного обучения в школе. Определить степень развития у малыша способности воспроизведения правильной последовательности явлений и действий, а также тренировать речь поможет методика сюжетных рисунков А. Н. Бернштейна.

Характеристика методики А. Н. Бернштейна

Основная цель методики «Последовательность событий» — исследование умения строить самостоятельные умозаключения, делать обобщения, выдерживать причинно-следственные связи, а также диагностика уровня сообразительности.

Было бы крайне нелогично руководствоваться в жизни только логикой.

Лешек Кумор, польский киновед и афорист

Автор методики, описанной в 1911 году — отечественный учёный Александр Николаевич Бернштейн, российский психотерапевт, один из основателей и энтузиастов отечественной психоаналитической школы. Будучи убеждённым сторонником идеи о перспективности нового психоаналитического учения, он стал автором программ и методических рекомендаций для исследования интеллектуальной сферы человека.

В современной психологической практике инструкция, рекомендации и этапы практической реализации опыта несколько изменены, модернизированы и усовершенствованы. Обычно метод используется для выяснения степени готовности ребёнка к школе . Востребована методика А. Н. Бернштейна и в клинической психологии как средство выявления олигофрении и умственной отсталости, а также дальнейшей терапии проблемы развития.

Применение методики «Последовательность событий» для дошкольников и младших школьников

Обычно тестирование проводится индивидуально с каждым ребёнком, но может применяться и в небольшой группе. Живой диалог помогает ребёнку активизировать коммуникационные навыки, раскрыться эмоционально. Дополнением может стать письменная работа или рисунок.

Исследователь обращается с такими словами: «Посмотри внимательно, перед тобой несколько картинок, на которых изображено одно и то же событие. Но их кто-то перемешал и спутал. Тебе необходимо разобраться, какую историю хотел рассказать художник. Начни с определения первой картинки, положи её сюда, потом определись со второй и всеми остальными по очереди. После того как ты разберёшься с картинками, составь рассказ».

Задание включает два последовательных этапа:

  1. Расположение карточек с рисунками.
  2. Устное логическое повествование по ним.

Для выполнения теста ребёнку необходимо установить различия отдельных сюжетных фрагментов рисунков и логическую последовательность фабулы в целом, разложив карточки в нужном порядке . Правильно составленная комбинация картинок доказывает, что у ребёнка есть понимание сюжета, а устный рассказ демонстрирует способность выразить смысл своими словами.

После завершения работы с рисунками исследователь фиксирует выбранную комбинацию (например: 4, 5, 1, 3, 2) и затраченное на раскладку время в протокольных записях. Затем просит ребёнка прокомментировать расположение карточек по смыслу. Если тестируемый ошибается, ему задаются наводящие вопросы с целью корректировки допущенных промахов, при этом важно отслеживать его эмоциональную и интеллектуальную реакцию.

Вопросы помогают понять причину ошибочного рассказа. Возможно, ребёнку не хватает уровня эрудиции или словарного запаса, но общий смысл событий прекрасно улавливается.

Иногда причинами неудачи в прохождении испытания могут являться личностные психологические особенности: закомплексованность, страх потерпеть неудачу, дискомфорт новой обстановки. Важен и возраст тестируемого: то, что для шестилетнего ребёнка считается хорошим уровнем, для семилетнего будет уже оцениваться как слабый, например, умение составить рассказ по наводящим вопросам . Вопросы и ответы тоже заносятся в протокол. Навыки грамотной и эффективной формулировки вопросов зависят от уровня квалификации экспериментатора.

Может возникнуть ситуация, когда во время общения ребёнок всё равно не понимает, что необходимо сделать. Тогда ему просто показывают правильный вариант первой картинки и предлагают продолжить попытку самому выстроить дальнейшую последовательность событий. То есть испытуемому предоставляется повторный шанс пройти тест.

Если же усилия остаются безуспешными, то психолог сам объясняет нужный алгоритм решения задачи. Затем, перемешав все карточки, ребёнку вновь предлагают восстановить ход событий. Новую серию картинок для закрепления приобретённого опыта ему предлагают только после того, как он справится с заданием . Таким образом, в протокол записываются все шаги, с помощью которых происходило обнаружение логических ошибок и достижение позитивного результата.

Особенности стимульного материала

Экспериментальным материалом служат сюжетные картинки, демонстрируемые испытуемому в заведомо нарушенной последовательности. Задача ребёнка — восстановить логическую комбинацию картинок, сопровождая своё решение устным рассказом. Вербальное описание позволяет определить уровень развития речи будущего первоклассника.

Основные критерии для определения уровня развития речи:

  • логичность;
  • связность;
  • грамотное построение предложений;
  • звуковая чистота произношения;
  • верная интонация;
  • эмоциональная окраска рассказа.

Существуют возрастные и смысловые серии стимульного материала, которые включают по 3–6 картинок, изображающих фабулу. Сюжеты в логике усложнения понима­ния скрытого смысла могут предъявляться детям от 5-7 лет до 9-10-летнего возраста:

  1. «Простой» — предлагает картинки с очевидным развитием событий — по фрагментам легко можно установить причинно-следственные и временные отношения. Например, кот, который пытается вытащить из молочной бутылки оказавшегося там мышонка.
  2. «Сложный» — содержит иллюстрации с подтекстом и скрытым смыслом сюжета, когда требуется привлечь знания о закономерностях явлений природы, окружающей действительности, делать выводы на основании понимания деталей, позы и мимики жестов изображённых персонажей.

Фотогалерея: картинки для проведения тестирования

Простой сюжет «Снеговик» с очевидным развитием событий, для детей 3–3,5 лет Комикс с явной причинно-следственной и временной связью «Ворона» применяется для тестирования детей младшего школьного возраста Для детей 7–8 лет эта последовательность не должна представлять сложности Сюжет «Картина» применяют при работе с детьми 5,5–6 лет Комикс Бидструпа «Клумба» можно использовать как способ тестирования детей 4,5–5 лет Нарисованная история с подтекстом «Садовод» подходит для детей младшего школьного возраста

Интерпретация результатов и выводы

Методом предусмотрена трёхступенчатая градация уровней оценивания итогов тестирования:

  1. Высокий — ребёнок справился с испытанием полностью, самостоятельно нашёл верную комбинацию рисунков и составил связный, грамматически адекватный рассказ.

    Допускается альтернативное, оригинальное восприятие сюжета, но при условии, что ребёнок осознанно аргументирует предложенную им трактовку.

  2. Средний — испытуемый преодолел первый этап правильного размещения изображений, но испытал затруднения в процессе выстраивания логически связного рассказа, который смог составить только при помощи психолога.
  3. Низкий — ребёнку не удалось установить последовательность картинок и составить рассказ.

Причин, по которым испытуемый не справился с заданием, может быть несколько:

  1. Каждая картинка осознаётся как автономная, не связанная с другими. В таком случае выстроить рассказ невозможно.
  2. Предложенная последовательность не соответствует устному описанию.
  3. Отдельные детали на каждом рисунке фиксируются без необходимого уровня обобщения.
  4. В дополнение к найденной им самим последовательности испытуемый предлагает нелогичный рассказ.

Неэластичность, негибкость мышления, проблемы с осмыслением и умственным развитием, как правило, проявляют себя в том, что тестируемый беспрепятственно проходит лёгкую серию и не в состоянии оценить более трудную . Проблемой может стать и количество картинок, которое бывает неподъёмным для ребёнка. Тогда потребуется сокращение объёма стимульного материала до минимального (с 6 до 3). Исследователь может столкнуться с настойчивым повтором одной и той же ошибки в том же месте. Такое «застревание» сигнализирует о серьёзных проблемах мозга испытуемого, вплоть до органических поражений.

Некоторые дети своевольно выдумывают собственные сюжетные линии, абсолютно не замечая содержания предложенных рисунков, не реагируя (или реагируя агрессивно) на аргументацию и наводящие вопросы, критические возражения экспериментатора, ведут себя неадекватно в ответ на предложенную помощь. Таким образом проявляется некритичность мышления — один из возможных симптомов умственной отсталости.

Этот метод может использоваться с целью раннего выявления эзофагитов у детей в условиях поликлиники. Следует указать, что этот тест носит ориентировочный характер при выявлении патологии пищевода и а настоящее время практически не используется. В основе теста лежит оценка субъективных ощущений ребенка при искусственном закислении нижней трети пищевода 0,1Н раствором соляной кислоты. Известно, что водородные ионы относительно легко диффундируют в слизистую оболочку пищевода, вызывая ощущение боли или изжоги. Воспроизводя искусственно ту клиническую ситуацию, которая возникает при гастроээофагеальном рефлюксе, врач имеет возможность заподозрить патологию пищевода при появлении у обследуемого загрудинных болевых или иных ощущений

Для проведения теста используется перфузионный аппарат, который состоит из двух сосудов, укрепленных & штативе, и соединенных через тройник с зондом. Первый сосуд заполнен физиологическим раствором, второй — 0,1Н раствором соляной кислоты. Температура обоих растворов около 37°С. Для регулирования лодачи жидкости из флаконов предусмотрено два зажима Обследуемому натощак вводится в пищевод дуоденальный зонд с таким расчетом, чтобы оливг была выше пищеводного клапана на 5 см. Перфузия начинается с введения в пищевод физиологического раствора со скоростью 30 каламин (поэтому в системе следует предусмотреть капельницу). Раствор вводится в течение 3-4 мин. Затем незаметно для обследуемого производят переключение на перфузию раствора соляной кислоты, вводится примерно 100 капель раствора за 3 мин.

Тест оценивается как положительный , если при перфузии раствора соляной кислоты в первые 3 мин исследования у возникла боль за грудиной или изжога; слабоположительный — если введение соляной кислоты вызывает ощущение холода за грудиной; и отрицательный — если перфузия соляной кислоты не вызывает никаких ощущений.

Ниточковая проба

Для диагностики гастроэзофагеального рефлюкса может помочь так называемая «ниточковая» проба, предложенная А В. Можейко (1991) и С В. Царелородцевым (1986)

Исследование проводится утром натощак. Перфорированный через каждый сантиметр тонкий зонд с протянутой внутри нитью» окрашенной конго красным, вводит ся через носовой ход до нижней трети пищевода (длина, равная расстоянию от под бородка до мечевидною отростка). Спустя 30-60 мин зонд с нитью извлекается.

В зависимости от кислотности пищевода цвет нити, удаленной из зонда, меняется от красно-фиолетового (рН 4,0-5,0) до синего (рН 3,0-4,0) и черного (ph

Ниточковая проба также носит ориентировочный характер , но она является очень надежной и может использоваться в непрофильных медицинских учрежде; ниях для диагностики гастроэзофагеального рефлюкса.

Исследование процессов восприятия и узнавания детей и взрослых.

Описание теста

Экспериментатор предъявляет испытуемому таблицу с изображением 9 фигур и предлагает внимательно рассмотреть и запомнить эти фигуры в течение 10 секунд. После чего испытуемому показывают вторую таблицу, с большим количеством фигур. Испытуемый должен обнаружить среди них фигуры из первой таблицы.

Инструкция к тесту

Первая инструкция : «Сейчас я покажу Вам изображения фигур. У Вас есть 10 секунд, чтобы постараться запомнить как можно большее количество фигур».

Вторая инструкция : «На следующем рисунке среди нарисованных фигур Вы должны выбрать те, которые видели в первом-случае».

Тестовый материал

Обработка результатов теста

Экспериментатор отмечает и подсчитывает количество правильно и неправильно узнанных фигур. Уровень узнавания (Е) подсчитывается по формуле:

E = M / 9 + N , где

  • М – число правильно узнанных фигур,
  • N – число неправильно узнанных фигур.

Наиболее оптимальный уровень узнавания равен единице, поэтому, чем ближе результаты испытуемого к единице, тем лучше у него функционируют процессы узнавания наглядного материала. Аналогичным образом можно исследовать процессы узнавания другого материала: буквенного, цифрового, словесного.

Источники
  • Узнавание фигур / Альманах психологических тестов. М., 1995, С.86-87.

Шкалы: уровень развития узнавания

Назначение теста

Исследование процессов восприятия и узнавания детей и взрослых.

Описание теста

Экспериментатор предъявляет испытуемому таблицу с изображением 9 фигур и предлагает внимательно рассмотреть и запомнить эти фигуры в течение 10 секунд. После чего испытуемому показывают вторую таблицу, с большим количеством фигур. Испытуемый должен обнаружить среди них фигуры из первой таблицы.

Инструкция к тесту

Первая инструкция: «Сейчас я покажу Вам изображения фигур. У Вас есть 10 секунд, чтобы постараться запомнить как можно большее количество фигур».

Вторая инструкция: «На следующем рисунке среди нарисованных фигур Вы должны выбрать те, которые видели в первом-случае».

Тест

Обработка и интерпретация результатов теста

Экспериментатор отмечает и подсчитывает количество правильно и неправильно узнанных фигур. Уровень узнавания (Е) подсчитывается по формуле:

E = M / 9 + N , где

. М — число правильно узнанных фигур,
. N — число неправильно узнанных фигур.

Наиболее оптимальный уровень узнавания равен единице, поэтому, чем ближе результаты испытуемого к единице, тем лучше у него функционируют процессы узнавания наглядного материала. Аналогичным образом можно исследовать процессы узнавания другого материала: буквенного, цифрового, словесного.

Источники

Узнавание фигур / Альманах психологических тестов. М., 1995, С.86-87.

На чтение 4 мин. Просмотров 3.3k.

Дошкольная диагностика — Методика «Узнавание фигур»

Чтобы изучить возможности восприятия и узнавания, а также зрительной памяти (кратковременной) следует использовать методику под названием «Узнавание фигур».

Для этого ребенку предлагают бумагу с изображенными фигурами, которые он должен тщательно рассмотреть.

При этом дети первого уровня успешности качественно изучают все предоставленные фигуры и максимально концентрируют свое внимание. Причем они демонстрируют высокую эффективность, находя от 6 до 8 фигур из всех 9.

Те дети, которые запомнили меньшее число фигур (5 из 9), отличаются меньшей концентрацией внимания, потому относятся ко второму уровню .

Третий уровень – это те, которые в случае непроизвольного запоминания выделяют от 3 до 4 фигур из 9. Если же задание повторяется, и руководитель ставит задачу запомнить фигуры, то результативность становится 5-7.

Четвертый уровень – это дети, которым удалось узнать не более 3 фигур.

Дошкольная диагностика сенсомоторной координации, психических процессов — произвольного внимания, степени сформированности представлений в пространстве, а также точной моторики руки осуществляется применением методики именуемой «Домик».


Ребенку ставят задачу срисовать картинку с образца (домик). При этом некоторые части этого домика – это элементы прописных букв. Такое упражнение проверяет возможности ребенка по точному копированию образца, который нарисован на доске. При этом ребенок может смотреть на него неограниченное время. Нет ограничений и по периоду выполнения проверки.

Первый уровень успешности – это выполнение данного задания почти безошибочно. Все элементы образца правильно размещаются относительно друг друга, а также в пространстве. Вертикальная и горизонтальная ось сделанного рисунка не смещается. Выполняя задачу, ребенок собран и сосредоточен. В процессе выполнения ребенок часто смотрит на источник.

Второй уровень – дети, успешно выполнившие задачу, но с 2-3 неточностями либо ошибками. Это может быть незначительное нарушение пропорций отдельных элементов касательно друг друга, небольшое изменение размера рисунка, пропуск некоторых элементов и пр. Проверяя собственную работу, дети видят неточности и корректируют их.

Третий уровень – существенное нарушение пропорций самого рисунка и его частей друг к другу. Некоторые элементы могут отсутствовать или располагаться в пространстве неправильно. Некоторые детали либо весь рисунок смещается по оси. Ошибок может быть 4 или 5. При выполнении задачи дети отвлекаются. Ошибки исправляют исключительно, когда им на них укажут.

В рисунках детей, отнесенных к четвертому уровню , нет отдельных частей. Кроме того, некоторые элементы могут быть размещены за пределами контура изображения либо отдельно.

Возможны повороты элементов или всего изображения на 90-180 гр. При осуществлении работы дети почти не смотрят на образец. Даже прямое указание на неточность либо ошибку не провоцирует ее корректировку. При этом число ошибок возрастает к 6 или больше.

В процессе копирования к ошибкам относится:

  • замена одной детали другой;
  • отсутствие детали. При этом правая, а также левая сторона забора – это отдельные части.
  • разрывы линий в местах их соединения;
  • некорректное изображение деталей;
  • увеличение либо уменьшение всего изображения либо его элементов больше, чем в два раза;
  • выход за пределы штриховочных линий;
  • изменение наклона линий больше, чем на 30 градусов;
  • некорректное размещение изображения в пространстве.

При этом протокол проведения тестирования обязательно должен содержать такие данные:

  • какой рукой осуществляется рисование фигур;
  • как быстро ребенок чертит линии элементов рисунка: медленно или быстро;
  • как ребенок взаимодействует с образцом изображения: проводит ли линии в воздухе, часто ли сверяется с ним, повторяет контуры имеющегося рисунка, сверяет ли уже нарисованное собственноручно с имеющимся образцом или рисует, полностью полагаясь на собственную память;
  • отвлекается ли ребенок во время своей работы на посторонние шумы или предметы;
  • после завершения работы над рисунком, сверяет ли ребенок его с имеющимся образцом.

Анализируя детскую работу, необходимо учитывать параметры созданных линий. Если они очень «лохматые» либо жирные, то, скорее всего ребенок тревожен. Правда, такие выводы не делаются, основываясь исключительно на рисунке.

Такое подозрение обязательно должно быть проверено экспериментальным способом. Для этого используется дошкольная диагностика, применяются специальные методики проверки уровня тревожности ребенка, которые помогают точно определить результат.

Задания для обследования детей 6—7 лет — Мегаобучалка

п/п   Наименование задания  
1 Сложи (разрезная картинка «Клоун»)
2 Представления об окружающем (беседа)
3 Представления о временах года
4 Количественные представления и счет
5 Расскажи (серия сюжетных картинок «Зимой»)
6 Дорисуй
7 Расскажи (сюжетная картинка «В лесу»)
8 Звуковой анализ слова
9 Продолжи ряд (письмо)
10 Узнавание фигур (тест Бернштейна)

 

Прежде чем начинать беседу с ребенком, надо дать ему осмотреться в новой для него ситуации. Лучше, чтобы родители находились рядом с ребенком, но были вне поля его зрения.

Разговаривать с ребенком надо доверительно, неофициально. В случае затруднений в выполнении задания и в ответе ребенка нужно подбодрить, не проявлять недовольство ответом. Первое задание должно носить невербальный характер.

1. СЛОЖИ (разрезная картинка «Клоун»). Задание направлено на выявление уровня развития интереса к познавательным задачам, установление сотрудничества с незнакомым взрослым в новой обстановке, выявление уровня развития целостного восприятия предметного изображения.

Оборудование: две картинки с изображением клоуна, одна из них разрезана на пять частей.

 

Наглядный материал: набор № 1, рис. 69, 70.

 

Проведение обследования: взрослый показывает ребенку части разрезной картинки, просит их рассмотреть и говорит: «Сложи картинку». В случае затруднений проводится обучение.

Обучение: взрослый показывает ребенку целую картинку и просит сделать такую же. Если ребенок снова не справляется с заданием, то взрослый начинает накладывать на целую картинку части разрезной — голову, затем руки. Далее ребенку предлагают завершить складывание клоуна. Только после этого его просят самостоятельно выполнить задание, ориентируясь на образец.

Оценка действий ребенка: принятие задания; способы выполнения; обучаемость; отношение к результату своей деятельности.

2. ПРЕДСТАВЛЕНИЯ ОБ ОКРУЖАЮЩЕМ (беседа). Задание направлено на выявление уровня ориентировки в окружающем мире, запаса знаний о себе и своей семье.

Рекомендуемые вопросы и задания: «Как тебя зовут? Сколько тебе лет? Когда твой день рождения? Назови свой домашний адрес. Расскажи о своем доме. Сколько в нем этажей? На каком этаже ваша квартира? Расскажи о своей семье. Как твоя фамилия? Как зовут твоих родителей? Кто еще с вами живет? Хочешь ли ты идти в школу? Как ты думаешь, что интересного будет в школе? В какой класс ты сразу поступишь?»

При затруднении можно задавать уточняющие вопросы.

Оценка действий ребенка: умение отвечать на заданные вопросы; знания и представления о себе и своей семье; наличие представлений о школе; уровень сформированности положительного отношения к школе.

3. ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О ВРЕМЕНАХ ГОДА. Задание направлено на выявление уровня сформированности представлений о временах года, их последовательности.

Оборудование: четыре сюжетные картинки с изображением специфических явлений природы для каждого времени года.

 

Наглядный материал: набор № 1, рис. 59—62.

 

Проведение обследования: взрослый спрашивает ребенка: «Как ты думаешь, какое сейчас время года?» Затем раскладывает перед ним сразу четыре картинки с изображением времен года и просит: «Найди картинку, где изображена зима (весна, лето, осень). А после нее какое время года наступит? А какое время года потом наступит? Найди картинку. Сколько всего времен года? Какое время года наступает после осени? Какое время года будет после весны? В какое время года ты пойдешь в школу? Как называется первый осенний месяц?» В случае затруднений проводится обучение.

Обучение: взрослый помогает ребенку соотнести настоящее время года с изображением на картинке, а потом задает ему уточняющие вопросы: «Когда зима закончится, какое время года наступит? В это время ярко светит солнце, снег тает, появляется зеленая трава, почки на деревьях. Найди это время года на картинке. А потом какое время года наступит? Найди его на картинке. Сколько всего времен года?»

Оценка действий ребенка: уровень сформированности представлений о временах года; умение самостоятельно определять и объяснять последовательность времен года; обучаемость; соотнесение описаний времен года с их изображением на картинках.

4. КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ И СЧЕТ. Задание направлено на выявление уровня сформированности представлений о количестве, умения выполнять счетные операции в уме (развитие наглядно-образного и элементов логического мышления).

Оборудование: счетные палочки, экран.

Проведение обследования. Первый вариант: ребенку предлагают посчитать до десяти и обратно. Затем задают вопросы: «Какое число больше: 5 или 6? Какое число меньше: 6 или 7? Какое число стоит после пяти? Какое число стоит между тремя и пятью?» Если ребенок испытывает затруднения в этих заданиях, то обучение не проводится.

Второй вариант: ребенку говорят: «Сейчас поиграем. Ты возьмешь 6 палочек, а я буду к ним прибавлять или от них отнимать. А ты скажешь, что я сделала: прибавила или отняла. А потом посчитаешь, сколько я прибавила или сколько отняла». Сначала предлагают взять шесть палочек из пятнадцати и, раскладывая их в ряд, просят ребенка пересчитать и запомнить их количество. Затем закрывают их экраном и отнимают две палочки. Затем открывают экран и спрашивают: «Что я сделала: прибавила или отняла? Сколько отняла?» Далее палочки кладут на место и закрывают экраном, предварительно попросив ребенка запомнить их количество. За экраном прибавляют две палочки, открывают его и спрашивают: «Что я сделала: прибавила или отняла? Сколько я прибавила?» И т. д.

Обучение: если ребенок затрудняется в определении операции и количества палочек, то ему предлагают решить такого же рода задачу в пределах пяти, при затруднении — в пределах четырех. Если ребенок не решает задачи в пределах четырех, то ему предлагают выполнить счетные операции в пределах трех с открытым результатом.

Третий вариант (решение устных задач) предлагается, если ребенок отвечает верно в первых двух вариантах. Условия задач: «Во дворе гуляли б детей, из них 2 мальчика, а остальные девочки. Сколько девочек гуляло во дворе?»; «На лужайке стоял пенек, а  из-за пенька торчали 6 ушек зайчиков. Как ты думаешь, сколько зайчиков сидело за пеньком?». В случае затруднений проводится обучение.

Обучение: ребенку предлагают воспользоваться палочками и решать задачи с опорой на них. Затем предлагают решить аналогичные задачи устно: «На лужайке сидели 6 зайчиков, 2 зайчика убежали. Сколько зайчиков осталось?»; «За забором стояли гуси. Были видны только лапки. Я посчитала: всего б лапок. Сколько гусей за забором?».

Оценка действий ребенка: принятие задачи и понимание ее условий; умение выполнять счетные операции по представлению; умение решать устные задачи в пределах шести; обучаемость — умение переносить способы решения задач на аналогичные; результат.

5. РАССКАЖИ (серия сюжетных картинок «Зимой»). Задание направлено на выявление умений определять временную последовательность событий, объединять последовательные действия в единый сюжет.

Оборудование: четыре сюжетные картинки с изображением знакомой детям жизненной ситуации. На первой картинке — идет снег, дети одеты в зимнюю одежду, ловят снежинки; на второй — дети катают снежный ком; на третьей — мальчик катает маленький ком для головы, а двое ребят ставят один ком на другой; на четвертой — дети слепили снеговика, вместо шапки надевают на него ведро.

 

Наглядный материал: набор № 1, рис. 71—74.

 

Проведение обследования: ребенку предлагают рассмотреть картинки и говорят: «Подумай, как составить рассказ по этим картинкам». Если ребенок затрудняется, то взрослый уточняет: «Разложи картинки так, чтобы получился рассказ, в котором есть начало, продолжение и окончание».

После выполнения задания (независимо от того, соблюдена ли правильная последовательность событий или нет) оценку действиям ребенка не дают, ему предлагают составить рассказ по серии сюжетных картинок. В процессе рассказывания ребенок может менять картинки местами.

Оценка результатов: понимание единого сюжета в этой серии картинок; учет временной и логической последовательности; способность передавать сюжет и последовательность событий в своем рассказе.

6. ДОРИСУЙ. Задание направлено на выявление уровня развития продуктивного воображения и графических навыков.

Оборудование: лист бумаги с изображением шести полукругов, фломастеры (цветные карандаши).

Проведение обследования: ребенку предлагают рассмотреть полукруги и дорисовать их так, чтобы получилось шесть разных предметов.

Обучение не проводится.

Оценка действий ребенка: принятие задачи и понимание ее условий; умение самостоятельно выполнить задание; анализ рисунков.

7. РАССКАЖИ (сюжетная картинка «В лесу»). Задание направлено на выявление уровня развития элементов логического мышления, умений воспринять целостную ситуацию, изображенную на картинке, устанавливать причинно-следственные связи между изображенными объектами и явлениями.

Оборудование: сюжетная картинка.

 

Наглядный материал: набор № 1, рис. 75.

 

Проведение обследования: ребенку предлагают рассмотреть сюжетную картинку, а затем составить по ней рассказ. В случае затруднений ему предлагают ответить на ряд последовательных вопросов: «Какое время года изображено на картинке? Куда пришли дети? Зачем дети пришли в лес? Кто пришел в лес с детьми? Что здесь произошло?» Уточняющие вопросы позволяют ребенку рассмотреть объекты и ситуацию, понять причинно-следственную зависимость.

Оценка результатов: принятие и понимание задания; умение самостоятельно понять сюжет и составить рассказ; способность устанавливать причинно-следственные зависимости; умение использовать помощь взрослого, результат.

8. ЗВУКОВОЙ АНАЛИЗ СЛОВА. Задание направлено на выявление умения анализировать звуковой состав слова, определение уровня развития предпосылок к обучению грамоте.

Оборудование: счетные палочки.

Проведение обследования: взрослый говорит: «Я сейчас назову слово, а ты должен определить, сколько в нем звуков». Далее называет слово доле, выясняет у ребенка количество звуков и просит: «Назови первый звук, третий, второй». Таким же образом предлагают проанализировать следующие слова: кот, стол, мост, хвост и т. д.

Обучение: если ребенок не может проанализировать слово дом, взрослый сам называет звуки по очереди и выкладывает соответствующее количество палочек. Затем вместе с ребенком проводится анализ слова кот. В тех случаях, когда ребенок понял, как анализируется слово, ему можно предложить анализ других слов.

Оценка действий ребенка: принятие и понимание задания; способы выполнения — самостоятельно или после обучения; наличие интереса к заданию.

9. ПРОДОЛЖИ РЯД (письмо). Задание направлено на проверку уровня развития готовности ребенка к письму, умения принять задание, связанное с учебной деятельностью, способности анализировать образец и работать по нему.

Оборудование: ручка, лист бумаги, на котором представлены три образца письменных заданий: на первой строчке палочки, на второй — палочки и крючочки, а на третьей — треугольники.

Проведение обследования: ребенка просят: «Продолжи строчку, как здесь».

Оценка действий: принятие и понимание задания; анализ образца; умение писать по образцу, соблюдая строчку и принцип чередования элементов букв; результат.

10. УЗНАВАНИЕ ФИГУР (тест Бернштейна). Задание направлено на проверку уровня развития памяти.

Оборудование: 2 таблицы с геометрическими фигурами.

 

Наглядный материал: набор № 1, рис. 76, 77.

 

Проведение обследования: ребенку предлагают таблицу с геометрическими фигурами, время показа 10 секунд. Ему говорят: «Запомни эти фигуры». После показа первой таблицы ребенку предъявляют другую, на которой фигуры-эталоны разбросаны среди множества разных фигур. Его просят найти среди них те геометрические фигуры, которые он видел в первой таблице.

Оценка действий ребенка: очень высокий результат — девять фигур узнаны верно, норма — семь-восемь фигур, низкий результат — шесть фигур, очень низкий — меньше шести фигур.

(PDF) Источники плохой успеваемости по комплексному тесту фигуры Рея-Остеррита среди детей с трудностями в обучении: подход к динамической оценке

Carlson, J.S., & Wiedl, K.H. (1979).

Дифференциальный подход к тестированию: Тестирование предельных возможностей с использованием

Матриц Равена. Intelligence, 3, 323±

344.

Denckla, M.B. (1985). Пересмотренное неврологическое обследование —

для выявления малозаметных симптомов. Бюллетень психофармакологии,

21, 773±779.

Денкла, М.Б., и Рудель, Р.Г. (1974).

Быстрое «автоматическое» называние изображенных предметов, цветов, букв

и цифр обычными детьми. Cortex, 10, 186±

202.

Feuerstein, R. (1979). Динамическая оценка

умственно отсталых исполнителей: оценка потенциала обучения —

устройство, теория, инструменты и методы.

Балтимор, Мэриленд: University Park Press.

Гаддес, У.Х., и Крокетт, Д.Дж.(1975). Тесты Spreen-

Benton Aphasia, нормативные данные как мера

нормального развития речи. Brain & Lan-

калибр, 2, 257±280.

Гальперин, Дж. М., Хили, Дж. М., Зейчик, Э., Лудман,

В. Л., и Вайнштейн, Л. (1989). Развитие

аспектов языковых и мнестических способностей у нормальных

детей. Journal of Clinical and Experimental

Нейропсихология, 11, 518 ± 528.

Харрис Н.С., Маркус Д.J., Rancier, SA, & Weiler,

MD (1999, август). Имя ¯способность к обучению

детей-инвалидов по сравнению с контрольной группой. Документ представлен на ежегодном съезде

Американской психологической ассоциации

, Бостон, Массачусетс.

Джитендра, А.К., и Каминуи, Э.Дж. (1993). Динамическая оценка

как подход к компенсационной оценке:

Описание и анализ. Лечебно-специальная

Просвещение, 14, 6±18.

Карапецас А.и Кантас, А. (1991). Зрительно-моторная

организация ребенка: нейропсихологический

подход. Перцептивные и моторные навыки, 72, 211 ± 217.

Кауфман, А., и Кауфман, Н. (1990). Краткий отчет Кауфмана

Тест на интеллект. Серкл Пайнс, Миннесота: Американская служба помощи

.

Кликпера, К. (1983). Плохое планирование как характеристика

поведения при решении проблем у детей с дислексией. Acta

Paedopsychiatrica, 49, 73±82.

Лидз, К.С. и Томас К. (1987). Устройство оценки дошкольного обучения

: Расширение статического подхода.

В C. Schneider Lidz (Ed.), Динамическая оценка

(стр. 288 ± 326). Нью-Йорк: Гилфорд Пресс.

Марквардт, ФК (1989). Индивидуальные достижения Пибоди —

тест ± пересмотренный. Серкл Пайнс, Миннесота: Американская служба помощи

.

Мельцер, Л. Дж. (1993). Использование стратегии у учащихся с

нарушениями обучаемости: проблема оценки.

В L. J. Meltzer (Ed.), Оценка стратегии и

инструкции для учащихся с ограниченными возможностями обучения:

От теории к практике (стр. 93±139). Остин, Техас:

PRO-ED.

Остерриет, П.А. (1944). Le test de copie d’une ®gure

комплекс. [Тест на копирование сложной фигуры.]

Archives de Psychologie, 30, 206 ± 356.

Пайвио, А. (1971). Образы и словесные процессы. Новый

Йорк: Холт, Райнхарт и Уинстон.

Рей, А.(1941). Психологический экзамен по номеру

при травматической энцефалопатии. [Психологическое

обследование травматической энцефалопатии.] Архив

de Psychologie, 28, 286±340.

Рейнольдс, Ч. Р., и Кампхаус, Р. В. (1992). Поведение

система оценки для детей. Серкл Пайнс, Миннесота:

Американская служба ориентации.

Шеслоу Д. и Адамс В. (1990). Широкий диапазон

Оценка памяти и обучения. Wilmington,

DE: Wide Range, Inc.

Стоун, Калифорния, и Конка, Л. (1993). Происхождение стратегии

дефицита у детей с ограниченными возможностями обучения:

социальная конструктивистская перспектива. В LJ Meltzer

(ред.), Оценка стратегии и обучение

учащихся с ограниченными возможностями обучения: от теории к

практике (стр. 23 ± 60). Остин, Техас: PRO-ED.

Суонсон, HL (1989). Инструкция по стратегии: Обзор

принципов и процедур для эффективного использования.

Нарушения обучаемости Ежеквартально, 12, 3±14.

Торгесен, Дж.К. (1994). Проблемы в оценке

исполнительной функции: Перспектива обработки информации

. В Г.Р. Лион (ред.), Системы отсчета

для оценки неспособности к обучению (стр. 143 ±

162). Балтимор, Мэриленд: Пол Х. Брукс.

Торгесен, Дж. К., Вагнер, Р. К., и Рашотте, К. (1999).

Тест на эффективность чтения слов. Остин, Техас:

PRO-ED.

Вабер, Д.П., и Бернштейн, Дж.Х. (1994). Повторяющийся

графомоторный сигнал у детей с ограниченными способностями к обучению и без них: тест «Повторяющиеся шаблоны

». Нейропсихология развития, 10, 51 ± 65.

Вабер, Д.П., и Бернштейн, Дж.Х. (1995). Показатели

детей с ограниченными возможностями обучения и

детей с ограниченными возможностями обучения в комплексе Рея-Остеррита Рис.Нейропсихология развития, 11 237 ±

252.

Waber, DP, Bernstein, JH, & Merola, J. (1989).

Воспоминание о комплексе Рея-Остеррита Рисунок:

Двухкодовая когнитивная нейропсихологическая модель.

Нейропсихология развития, 5, 1±15.

Вабер, Д. П., и Холмс, Дж. М. (1985). Оценка

детских копий продукции Rey-Osterrieth

Комплексная фигура. Журнал клинической и экспериментальной нейропсихологии

, 7, 264 ± 280.

Вабер, Д. П., и Холмс, Дж. М. (1986). Оценка детских воспоминаний

детей по модели Рея-Остеррита

Комплексная фигура. Journal of Clinical and Experimental Neuropsychology, 8, 563 ± 580.

Waber, DP, Isquith, P.K., Kahn, CM, Romero, I.,

Sallan, SE, & Tarbell, NJ (1994). Метакогнитивные

факторы зрительно-пространственных навыков у долговременных

выживших после острого лимфобластного лейкоза:

экспериментальный подход к комплексному тесту Рей-Остерриета

.Нейропсихология развития,

10, 349 ± 367.

ПОКАЗАТЕЛИ ROCF У ДЕТЕЙ LD 355

Вводное исследование нарушений речи у испано-английских двуязычных детей, которые заикаются и не заикаются во время повествования

Назначение

Целью данного исследования является изучение частоты и типа нарушений речи. (заикающийся и незаикающийся) у двуязычных испано-английских (SE) детей которые заикаются (CWS) для SE детей, которые не заикаются (CWNS) во время повествовательных образцов на испанском и английском языках, чтобы предоставить дополнительную диагностическую информацию для этого население и предварительные данные для расширения этого исследования.

Метод

В число участников вошли шесть детей-билингвов с SE (три CWS, три CWNS) в возраст от 5 лет до 7,5 (лет; месяцев) и набраны из окрестностей Хьюстона, Район Техас. Участники предоставили образец повествования на английском и испанском языках. Частота речевых дефектов заносили в таблицу и измеряли среднюю продолжительность высказывания каждый образец.

Результаты

Результаты показывают, что обе группы говорящих обычно превышают диагностические критерии используется при заикании в развитии.Независимо от языка, на котором говорят участники CWS имели частоту нарушений речи, подобных заиканию, которые соответствовали или превышали диагностические Критерии развития заикания, основанные на одноязычных носителях английского языка. Участники CWNS отличались соответствием критериям в зависимости от языка, на котором разговорный, причем один из трех CWNS превышает критерии на обоих языках, а один превышение критериев процента заикающихся нарушений речи в одном язык.

Заключение

Результаты этого исследования способствуют разработке более подходящей диагностической критерии для двуязычных детей, говорящих на SE, чтобы помочь уменьшить ошибочные диагнозы заикания в этой популяции.

Задержка внутриутробного развития: выявление и лечение

1. Бернштейн И., Габбе С.Г. Задержка внутриутробного развития. В: Gabbe SG, Niebyl JR, Simpson JL, Annas GJ и др., ред. Акушерство: нормальная и проблемная беременность.3-е изд. Нью-Йорк: Черчилль Ливингстон, 1996:863–86….

2. Wolfe HM, Gross TL. Повышенный риск задержки роста плода. В: Гросс Т.Л., Сокол Р.Дж., ред. Задержка внутриутробного развития: практический подход. Чикаго: Ежегодник медицинских издателей, 1989: 111–24.

3. Неерхоф М.Г. Причины задержки внутриутробного развития. Клин Перинатол . 1995; 22: 375–85.

4. Creasy RK, Resnik R. Задержка внутриутробного развития. В: Кризи Р.К., Резник Р., ред.Медицина матери и плода: принципы и практика. 3-е изд. Филадельфия: Сондерс, 1994: 558–74.

5. Задержка роста плода. В: Cunningham FG, et al., ред. Уильямс Акушерство. 20-е изд. Стэмфорд, Коннектикут: Appleton & Lange, 1997: 839–54.

6. Manning FA, Hohler C. Задержка внутриутробного развития: диагностика, прогнозирование и лечение на основе ультразвуковых методов. В: Fleischer AC, et al., ред. Принципы и практика УЗИ в акушерстве и гинекологии.4-е изд. Норуолк, Коннектикут: Appleton & Lange, 1991: 331–48.

7. Крейго С.Д. Роль УЗИ в диагностике и лечении задержки внутриутробного развития. Семин Перинатол . 1994; 18: 292–304.

8. Отт В.Дж. Диагноз: изменение роста плода. Obstet Gynecol Clin North Am . 1988; 15: 237–63.

9. Теджани Н.А. Рецидив задержки внутриутробного развития. Акушерство Гинекол . 1982; 59: 329–31.

10. Вулф Х.М., Валовая ТЛ, Сокол РЖ. Рецидивирующие малые для гестационного возраста роды: перинатальные риски и исходы. Am J Obstet Gynecol . 1987; 157: 288–93.

11. Хэдлок ФП, Сдерживать РЛ, Харрист РБ, Рокер Э, Парк СК. Независимый от даты предиктор задержки внутриутробного развития: отношение длины бедренной кости к окружности живота. AJR Am J Рентгенол . 1983; 141: 979–84.

12.Браун ХЛ, Миллер Дж. М. младший, Габерт Х.А., Кислинг Г. Ультразвуковое распознавание плода малого размера для гестационного возраста. Акушерство Гинекол . 1987; 69: 631–5.

13. Резерфорд Ю.В., Фелан Дж.П., резюме Смита, Джейкобс Н. Четырехквадрантная оценка объема амниотической жидкости: дополнение к дородовому тестированию частоты сердечных сокращений плода. Акушерство Гинекол . 1987; 70 (3 часть 1): 353–6.

14. Мур Т.Р., Кэйл Дж. Э.Индекс амниотической жидкости при нормальной беременности человека. Am J Obstet Gynecol . 1990; 162:1168–73.

15. Голан А, Лин Г, Эврон С, Ариэли С, Нив Д, Давид депутат. Маловодие: осложнения для матери и исход для плода в 145 случаях. Гинекол Обстет Инвест . 1994; 37: 91–95.

16. Маккарди К.М. младший, Семена JW. Маловодие: проблемы и лечение. Семин Перинатол . 1993; 17: 183–96.

17. Шалев Э., Блондхейм О, Пелег Д. Использование кордоцентеза при ведении недоношенных или замерших в росте плодов при аномальном мониторинге. Акушер-гинеколог Surv . 1995; 50: 839–44.

18. Наджотт М.П., Резюме башен, Асрат Т, Фримен РК. Перинатальный исход с модифицированным биофизическим профилем. Am J Obstet Gynecol . 1994; 170:1672–6.

19. Лин С.С., Моавад А.Х., Розенов П.Дж., Река П.Кислотно-основные характеристики плодов с задержкой внутриутробного развития в родах и родоразрешении. Am J Obstet Gynecol . 1980; 137: 553–9.

20. Soothill PW, Николаидес К.Х., Кэмпбелл С. Пренатальная асфиксия, гиперлактаемия, гипогликемия и эритробластоз у плодов с задержкой роста. Br Med J [Clin Res] . 1987; 294:1051–3.

21. Лейтич Х, Эгартер С, Хуслейн П., Кайдер АК, Шемпер М.Метаанализ низких доз аспирина для предотвращения задержки внутриутробного развития. Br J Obstet Gynaecol . 1997; 104:450–9.

22. Фицхардинг П.М., Инвуд С. Долгосрочный рост у низкорослых детей. Приложение Acta Paediatr Scand . 1989; 349: 27–33.

23. Сун И.К., Вор Б, О В. Результаты роста и развития нервной системы у младенцев с очень низкой массой тела при рождении и задержкой внутриутробного развития: сравнение с контрольной группой, соответствующей массе тела при рождении и гестационному возрасту. J Педиатр . 1993; 123: 618–24.

24. Маркестад Т, Вик Т, Альстен Г, Гебре-Медин М, Скьервен Р, Якобсен Г, и другие. Дети с малым весом для гестационного возраста (SGA), рожденные в срок: рост и развитие в течение первого года жизни. Acta Obstet Gynecol Scand Suppl . 1997; 165:93–101.

25. ван дер Рейден-Лейкман И.Е., де Сонневиль Л.М., Свааб-Барневельд Х.Дж., Слайпер FM, Ферхюльст ФК.Оценка внимания до и после 2 лет лечения гормоном роста у детей с задержкой внутриутробного развития. J Clin Exp Нейропсихология . 1997; 19:101–18.

Принципы распознавания микроРНК-мишеней

Образец цитирования: Бреннеке Дж., Старк А., Рассел Р.Б., Коэн С.М. (2005) Принципы распознавания микроРНК-мишеней. PLoS Биол 3(3): е85. https://doi.org/10.1371/journal.pbio.0030085

Академический редактор: Джеймс С.Каррингтон, Университет штата Орегон, Соединенные Штаты Америки

Поступила в редакцию: 21 сентября 2004 г.; Принято: 4 января 2005 г .; Опубликовано: 15 февраля 2005 г.

Авторское право: © 2005 Brennecke et al. Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с лицензией Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии надлежащего цитирования оригинальной работы.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Сокращения: Брд , Бородатый ; ЭГФП, усиленный зеленый флуоресцентный белок; микроРНК, микроРНК; Скр , Половые гребни уменьшены

Введение

МикроРНК (миРНК) представляют собой небольшие некодирующие РНК, которые служат посттранскрипционными регуляторами экспрессии генов у растений и животных.Они действуют путем связывания с комплементарными сайтами на мРНК-мишенях, вызывая расщепление или репрессию продуктивной трансляции (обзор в [1,2,3,4]). Важность микроРНК для развития подчеркивается тем фактом, что они составляют примерно 1% генов у животных и часто высококонсервативны у широкого круга видов (например, [5,6,7]). Кроме того, мутации в белках, необходимых для функции miRNA или биогенеза, нарушают развитие животных [8,9,10,11,12,13,14,15].

На сегодняшний день функции приписаны лишь нескольким из сотен генов miRNA животных.Мутантные фенотипы у нематод и мух привели к открытию того, что lin-4 и let-7 миРНК контролируют время развития [16,17], что lsy-6 миРНК регулирует лево-правую асимметрию в нервной системе [16, 17]. 18], что bantam miRNA контролируют рост ткани [19] и что bantam и miR-14 контролируют апоптоз [19,20]. Мышь miR-181 преимущественно экспрессируется в костном мозге и, как было показано, участвует в гемопоэтической дифференцировке [21].Недавно было обнаружено, что miR-375 мыши является специфичной для островков поджелудочной железы miRNA, которая регулирует секрецию инсулина [22].

Прогнозирование мишеней микроРНК обеспечивает альтернативный подход к назначению биологических функций. Это оказалось очень эффективным у растений, где miRNA и мРНК-мишень часто почти полностью комплементарны [23,24,25]. У животных функциональные дуплексы могут быть более вариабельны по структуре: они содержат только короткие комплементарные участки последовательностей, прерываемые пробелами и несовпадениями.На сегодняшний день не разработаны специфические правила для функциональной пары miRNA-мишень, которые захватывают все известные функциональные мишени. Это создало проблемы для стратегий поиска, которые используют различные предположения о том, как лучше всего идентифицировать функциональные сайты. В результате количество прогнозируемых целей значительно различается с лишь ограниченным перекрытием целей высшего ранга, что указывает на то, что эти подходы могут охватывать только подмножества реальных целей и/или могут включать большое количество фоновых совпадений ([19, 26, 27,28,29,30]; просмотрено [31]).Тем не менее, ряд предсказанных мишеней доказал свою работоспособность при экспериментальных испытаниях [19, 26, 27, 29].

Лучшее понимание требований к спариванию между miRNA и мишенью, несомненно, улучшит предсказания miRNA-мишеней у животных. Известно, что определенные цис -регуляторные элементы в 3′-UTR Drosophila комплементарны 5′-концам некоторых микроРНК [32]. Важность 5′-конца миРНК также стала очевидна из характеристик спаривания и эволюционной консервации известных сайтов-мишеней [26], а также из наблюдения неслучайного статистического сигнала, специфичного для 5′-конца, в полногеномных предсказаниях мишеней [26]. 27].Эксперименты с тканевой культурой также подчеркнули важность 5′-спаривания и дали некоторое представление об общих структурных требованиях [29, 33, 34], хотя различные исследования в некоторой степени противоречили друг другу и известным сайтам-мишеням (обзоры в [31]). На сегодняшний день не приписывается никакой конкретной роли 3′-конца микроРНК, несмотря на тот факт, что микроРНК имеют тенденцию сохраняться по всей своей длине.

Здесь мы систематически оцениваем минимальные требования для функционального дуплекса miRNA-мишень in vivo.Эти эксперименты позволили нам идентифицировать две широкие категории сайтов-мишеней miRNA. Мишени в первой категории, «5′-доминантные» сайты, хорошо сочетаются с парой оснований на 5′-конце микроРНК. Несмотря на то, что в этом классе существует континуум качества 3′-спаривания, полезно различать два подтипа: «канонические» сайты, которые хорошо спариваются как на 5′-, так и на 3′-концах, и «исходные» сайты, которые требуют небольшого или нет поддержки сопряжения 3 ‘. Мишени во второй категории, «3′-компенсаторные» сайты, имеют слабое 5′-спаривание оснований и зависят от сильного компенсаторного спаривания с 3′-концом микроРНК.Мы представляем доказательства того, что все эти типы сайтов используются для обеспечения регуляции miRNAs, и показываем, что 3′-компенсаторный класс сайтов-мишеней используется для различения отдельных членов семейств miRNA in vivo. Полногеномный статистический анализ позволяет нам оценить, что средняя микроРНК имеет примерно 100 эволюционно консервативных сайтов-мишеней, что указывает на то, что микроРНК регулируют большую часть генов, кодирующих белок. Оценка качества спаривания 3’ предполагает, что семенные сайты составляют самую большую группу.Сайты этого типа в значительной степени игнорировались в предыдущих методах прогнозирования целей.

Результаты

Минимальный сайт-мишень микроРНК

Чтобы улучшить наше понимание минимальных требований к функциональному сайту-мишени микроРНК, мы использовали простой анализ in vivo на имагинальном диске крыла дрозофилы . Мы экспрессировали микроРНК в полосе клеток в центральной области диска и оценили ее способность подавлять экспрессию повсеместно транскрибируемого трансгена усиленного зеленого флуоресцентного белка (EGFP), содержащего единственный сайт-мишень в его 3′-UTR.Степень репрессии оценивали путем сравнения уровней EGFP в клетках, экспрессирующих миРНК, и соседних неэкспрессирующих клетках. Экспрессия микроРНК сильно снижала экспрессию EGFP из трансгенов, содержащих один функциональный сайт-мишень (рис. 1А).

Рисунок 1. Комплементарность 5′-концу микроРНК важна для функции сайта-мишени In Vivo

(A) Анализ in vivo для регуляции сайта-мишени в имагинальном диске крыла. Репортер EGFP экспрессируется во всех клетках (зеленый). Клетки, экспрессирующие микроРНК под контролем ptcGal4, показаны красным цветом.Функциональные сайты-мишени обеспечивают сильную репрессию GFP с помощью микроРНК (посередине). Нефункциональных целевых сайтов нет (справа). Желтые прямоугольники обозначают область диска, показанную на (B) и последующих рисунках.

(B) Регуляция отдельных сайтов-мишеней с помощью miR-7. Числа в левом верхнем углу каждого изображения указывают на несовпадающий нуклеотид в целевом сайте. Позиции, важные для регулирования, показаны красным цветом, необязательные позиции — зеленым. Регуляция miRNA полностью устраняется только в нескольких случаях.

(C) Сводка величины репрессии репортерного гена для серии в (B) и для второго набора, включающего miR-278 и сайт-мишень, напоминающий сайт miR-9 в Lyra [26]. Позиции, важные для регулирования, показаны красным цветом, необязательные позиции — зеленым. Планки погрешностей основаны на измерениях 3–5 отдельных дисков.

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.0030085.g001

В первой серии экспериментов мы спросили, какая часть дуплекса РНК наиболее важна для регуляции мишени.Был подготовлен набор трансгенных мух, каждая из которых содержала разные сайты-мишени для miR-7 в 3′-UTR репортерной конструкции EGFP. Начальный сайт напоминал самый сильный сайт miRNA bantam в его биологической мишени hid [19] и обеспечивал сильную регуляцию, когда присутствовал в единственной копии в 3’UTR репортерного гена (рис. 1B). Мы проверили влияние внесения изменений одного нуклеотида в сайт-мишень для получения несоответствий в разных положениях дуплекса с микроРНК (обратите внимание, что несоответствия сайтов-мишеней были единственной переменной в этих экспериментах).На эффективную репрессию, опосредованную стартовым сайтом, не влияло несовпадение в положениях 1, 9 или 10, но любое несовпадение в положениях со 2 по 8 сильно снижало величину целевой регуляции. Два одновременных несовпадения, введенных в 3′-область, оказали лишь небольшое влияние на репрессию мишени, увеличив репортерную активность с 10% до 30%. Чтобы исключить возможность того, что эти результаты были специфичны для тестируемой последовательности miRNA или структуры дуплекса, мы повторили эксперимент с miR-278 и другой структурой дуплекса.Результаты были схожими, за исключением того, что в этом случае спаривание позиции 8 не имело значения для регуляции (рис. 1С). Более того, некоторые несовпадения в позициях 2–7 все еще допускали репрессию экспрессии EGFP до 50%. Взятые вместе, эти наблюдения подтверждают предыдущие предположения о том, что обширное спаривание оснований с 5′-концом miRNA важно для функции сайта-мишени [26,27,29,32,34].

Затем мы определили минимальную комплементарность 5′-последовательности, необходимую для придания целевого регулирования.Мы называем сердцевину комплементарности 5′-последовательности, необходимой для распознавания сайта-мишени, «семенем» (Lewis et al. [27]). Все возможные 6-мерные, 5-мерные и 4-мерные семена, комплементарные первым восьми нуклеотидам миРНК, были протестированы в контексте сайта, который допускал сильное спаривание оснований с 3′-концом миРНК (рис. 2А). Семя было отделено от области полного спаривания 3′-концов постоянной центральной выпуклостью. 5-мерные и 6-мерные затравки, начинающиеся в положениях 1 или 2, были функциональными. Удивительно, но всего лишь четыре пары оснований в положениях 2–5 обеспечивали эффективное целевое регулирование в этих условиях, тогда как основания 1–4 были совершенно неэффективны.4-мерные, 5-мерные или 6-мерные затравки, начинающиеся с позиции 3, были менее эффективны. Эти результаты предполагают, что функциональное семя требует непрерывной спирали, по крайней мере, из 4 или 5 нуклеотидов, и что существует некоторая позиционная зависимость от спаривания, поскольку сайты, которые производят сравнимые энергии спаривания, различаются по своей способности функционировать. Например, первые два дуплекса на рисунке 2A (4mer, верхний ряд) имеют одинаковую энергию 5′-спаривания (ΔG для первых 8 нуклеотидов составляла -8,9 ккал/моль), но только один является функциональным. Точно так же третий 4-мерный дуплекс и четвертый 5-мерный дуплекс (средний ряд) имеют одинаковую энергию (-8.7 ккал/моль), но работает только один. Таким образом, мы не находим четкой корреляции между энергией и функцией 5′-спаривания, как сообщалось в [34]. Эти эксперименты также показывают, что экстенсивное 3′-спаривание до 17 нуклеотидов в отсутствие минимального 5′-элемента недостаточно для обеспечения регуляции. Следовательно, целевые поиски, основанные в первую очередь на оптимизации степени спаривания оснований или общей свободной энергии образования дуплекса, будут включать множество нефункциональных сайтов-мишеней [28,30,35] и ранжирование сайтов-мишеней микроРНК в соответствии с общей комплементарностью или свободной энергией. образования дуплексов может не отражать их биологическую активность [26,27,28,30,35].

Рисунок 2. Минимальный сайт-мишень микроРНК

(A) Тесты in vivo функции сайтов-мишеней с 6-мерными, 5-мерными и 4-мерными семенами, комплементарными первым восьми нуклеотидам микроРНК. Сайты были спроектированы так, чтобы иметь оптимальную поддержку от 3-футового спаривания. Первый начальный сайт 4mer показывает, что экстенсивная комплементарность 3′-области miRNA недостаточна для регуляции in vivo.

(B) Регуляция 8-мерных, 7-мерных и 6-мерных затравочных сайтов, не комплементарных 3′-концу микроРНК.Тестовый UTR содержал один сайт (первый столбец) или два идентичных сайта (второй столбец).

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.0030085.g002

Чтобы определить минимальную длину 5-футовых начальных совпадений, достаточную для обеспечения регулирования, мы протестировали отдельные сайты, которые сочетаются с восемью, семью или шестью последовательные основания к 5′-концу микроРНК, но не спариваются с ее 3′-концом (рис. 2В). Неожиданно оказалось, что одного 8mer seed (миРНК в положениях 1-8) было достаточно, чтобы обеспечить сильную регуляцию с помощью миРНК.Одно 7-мерное семя (положения 2–8) также было функциональным, хотя и менее эффективным. Величина регуляции 8-мерных и 7-мерных семян сильно увеличивалась, когда в UTR вводили две копии сайта. Напротив, семена 6mer не проявляли регуляции, даже когда присутствовали в двух копиях. Сравнительные результаты были недавно получены для двух копий 8mer-сайта с ограниченной способностью к 3′ спариванию в клеточном анализе [34]. Эти результаты не поддерживают требование о центральной выпуклости, как предполагалось ранее [29].

Мы позаботились о конструировании 3′-концов микроРНК, чтобы исключить любое 3′-спаривание с соседней последовательностью в соответствии с предсказанием вторичной структуры РНК. Тем не менее, мы не можем исключить возможность того, что обширное петлеобразование последовательности UTR может позволить 3′-концу спариться с последовательностями, находящимися ниже по течению в наших репортерных конструкциях. Обратите внимание, однако, что даже если имело место отдаленное 3′-спаривание и требовалось для функции 8- и 7-мерных затравок, этого недостаточно для 5′-соответствий с менее чем семью комплементарными основаниями (все тестовые сайты находятся в одном контексте последовательности; рис. 2Б).Кроме того, спаривание на случайном уровне будет происходить в любой последовательности, если разрешены достаточно длинные циклы. Однако, требуют ли рибонуклеопротеиновые комплексы, участвующие в репрессии трансляции, 3′-спаривания, и способны ли они допускать экстенсивное образование петель для достижения этого, остается открытым вопросом. В вычислительном отношении удаленное 3′-спаривание нельзя отличить от случайных совпадений, если разрешены циклы любой длины. Исходя из этого, к любому сайту с 7- или 8-мерным семенем следует относиться серьезно, особенно когда он эволюционно законсервирован.

Из этих экспериментов мы делаем вывод, что (1) комплементарность семи или более оснований 5′-концу miRNA достаточна для обеспечения регуляции, даже если 3′-UTR-мишень содержит только один сайт; (2) сайты с более слабой 5′-комплементарностью требуют компенсаторного спаривания с 3′-концом микроРНК, чтобы обеспечить регуляцию; и (3) экстенсивного спаривания с 3′-концом miRNA недостаточно для обеспечения регуляции самой по себе без минимального элемента 5′-комплементарности.

Влияние пар оснований G:U и выпуклостей в семени

Несколько подтвержденных генов-мишеней микроРНК содержат предсказанные сайты связывания с семенами, которые прерваны парами оснований G:U или выпуклостями одиночных нуклеотидов [17,19,26,36,37,38,39].В большинстве случаев эти мРНК содержат несколько предсказанных сайтов-мишеней, и вклад отдельных сайтов не тестировался. Тесты in vitro показали, что сайты, содержащие пары оснований G:U, могут функционировать [29,34], но что пары оснований G:U вносят меньший вклад в функцию сайта-мишени, чем можно было бы ожидать, исходя из их вклада в предсказанную энергию спаривания оснований. [34]. Мы проверили способность отдельных участков с семенами, содержащими пары оснований G:U и выпуклости, функционировать in vivo. Одну, две или три пары оснований G:U вводили в отдельные сайты-мишени с 8-мерными, 7-мерными или 6-мерными затравками (рис. 3А).Одна пара оснований G:U вызывала явное снижение эффективности регуляции 8-мерным затравочным сайтом и 7-мерным затравочным сайтом. Сайт с 6-мерным сидом почти полностью потерял свою активность. Наличие более одной пары оснований G:U поставило под угрозу активность всех сайтов. Поскольку сайты-мишени были разработаны для обеспечения оптимального 3′-спаривания, мы пришли к выводу, что пары оснований G:U в затравочной области всегда вредны.

Рисунок 3. Эффекты пар оснований G:U и выпуклостей

(A) Регулирование сайтов с 8-мерными, 7-мерными или 6-мерными семенами (рядами), содержащими ноль, одну, две или три пары оснований G:U в исходная область (столбцы).

(B) Регуляция сайтов с выпуклостями в последовательности-мишени или в микроРНК.

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.0030085.g003

Одиночные нуклеотидные выпуклости в семени обнаружены в let-7 мишени lin-41 и в lin-4 мишени лин-14 [17,36,37]. Недавние эксперименты с тканевой культурой привели к предположению, что такие выпуклости допустимы, если они расположены симметрично в области семени [29]. Мы протестировали ряд сайтов с выпуклостями одиночных нуклеотидов в мишени или микроРНК (рис. 3B).Только некоторые из этих сайтов обеспечивали хорошую регуляцию репортерного гена. Наши результаты не подтверждают идею о том, что такие сайты зависят от симметричного расположения пар оснований, окружающих выпуклость. Мы также отмечаем, что идентичность выпуклого нуклеотида, по-видимому, имеет значение. Хотя ясно, что некоторые сайты-мишени с одним утолщением нуклеотидов или одним несоответствием могут быть функциональными, если они поддерживаются экстенсивной комплементарностью к 3′-концу miRNA, невозможно обобщить их потенциальную функцию.

Функциональные категории целевых сайтов

Признавая, что существует континуум качества спаривания оснований между микроРНК и сайтами-мишенями, представленные выше эксперименты предполагают, что сайты, которые критически зависят от спаривания с 5′-концом микроРНК (5′-доминантные сайты), можно отличить от тех, которые не могут функционируют без сильного спаривания с 3′-концом микроРНК (3′-компенсаторные сайты). Компенсаторная группа 3′ включает в себя затравочные совпадения из четырех-шести пар оснований и затравки из семи или восьми оснований, которые содержат пары оснований G:U, выпуклости одиночных нуклеотидов или несоответствия.

Мы считаем полезным различать две подгруппы 5′-доминантных сайтов: сайты с хорошим спариванием как с 5′-, так и с 3′-концом миРНК (канонические сайты) и сайты с хорошим 5′-спариванием, но с небольшим спариванием или без 3′-спаривания ( семенные участки). Мы считаем, что начальные сайты — это те, в которых нет доказательств того, что спаривание 3′-конца микроРНК с соседними последовательностями лучше, чем можно было бы ожидать случайным образом. Мы не можем исключить возможность того, что некоторые сайты, которые мы идентифицируем как начальные сайты, могут поддерживаться дополнительными дальними 3′-спариваниями.В вычислительном отношении это всегда возможно, если разрешены достаточно длинные циклы в последовательности UTR. Функционируют ли длинные петли in vivo еще предстоит определить.

Канонические сайты имеют сильное совпадение с исходным кодом, поддерживаемое сильным спариванием оснований с 3′-концом миРНК. Таким образом, канонические сайты можно рассматривать как расширение зародышевого типа (с улучшенным 3′-спариванием в дополнение к достаточному количеству 5′-затравок) или как расширение 3′-компенсаторного типа (с улучшенным качеством 5′-затравки в дополнение к достаточному количеству 3 «спаривание»).По отдельности канонические сайты, вероятно, будут более эффективными, чем сайты других типов, из-за их более высокой энергии сопряжения и могут функционировать в одной копии. Ожидается, что из-за их более низкой энергии спаривания начальные сайты будут более эффективными, если они представлены более чем в одной копии. На рис. 4 представлены примеры различных типов сайтов в биологически значимых мишенях miRNA и иллюстрируется их эволюционная консервация во множественных геномах дрозофилид.

Рисунок 4. Три класса сайтов-мишеней микроРНК

Модель канонических (слева), исходных (посередине) и 3′-компенсаторных (справа) сайтов-мишеней.На верхней диаграмме показан способ спаривания между сайтом-мишенью (верхняя линия) и микроРНК (нижняя линия, цвет). Далее в каждом столбце приведены диаграммы паттерна сохранения 3’UTR. Вертикальные черные полосы показывают участки по меньшей мере из шести нуклеотидов, которые сохранились в нескольких геномах дрозофил. Сайты-мишени для miR-7, miR-4, и miR-10 показаны в виде цветных горизонтальных полос под UTR. Сайты для других микроРНК показаны черными полосами. Внизу в каждом столбце показана предсказанная структура дуплекса между микроРНК и ее сайтом-мишенью; канонические пары оснований отмечены заштрихованными кружками, пары оснований G:U — незакрашенными кружками.Выравнивание последовательностей показывает консервацию нуклеотидов этих сайтов-мишеней у разных видов дрозофилид. Нуклеотиды, которые, как предполагается, спариваются с микроРНК, выделены жирным шрифтом; нуклеотиды, которые считаются неспаренными, выделены серым цветом. Красные звездочки указывают на 100% сохранение последовательности; серые звездочки указывают на сохранение спаривания оснований с микроРНК, включая пары G:U. Дополнительное выравнивание последовательностей для сайта-мишени miR-10 в Scr в Tribolium castanaeum, Anopheles gambiae, и Bombyx mori подтверждает это предсказание.Обратите внимание, что пониженное качество 3′-компенсации у этих видов компенсируется наличием 7-мерного семени более высокого качества. A. ga, Anopheles gambiae; Б. мо, Б. мори; Д. ан, Д. ananassae; Д. я, Д. melanogaster; Д. пс, Д. псевдообскура; Д. си, Д. simulans; Д. ви, Д. вирилис; Д. я, Д. якуба; Т. са, Т. castanaeum.

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.0030085.g004

Большинство идентифицированных в настоящее время сайтов-мишеней микроРНК являются каноническими. Например, волосатая 3′-UTR содержит один сайт для miR-7, с 9-мерным семенем и участком 3′-комплементарности.Было показано, что этот сайт функционален in vivo [26], и он поразительно консервативен в соответствии с семенами и в степени комплементарности 3′-концу miR-7 во всех шести ортологичных 3′-UTR.

Хотя сид-сайты ранее не были идентифицированы как функциональные сайты-мишени miRNA, есть некоторые свидетельства того, что они существуют in vivo. Например, 3′-UTR Bearded (Brd) содержит три элемента последовательности, известные как блоки Brd, которые комплементарны 5′-области miR-4 и miR-79 [32,40].Было показано, что боксы Brd репрессируют экспрессию репортерного гена in vivo, предположительно, посредством микроРНК, поскольку экспрессия репортера Brd 3’UTR повышена в мутантных клетках dicer-1 , которые неспособны продуцировать какие-либо микроРНК [14]. ]. Все три сайта-мишени Brd box состоят из 7-мерных семян с небольшим количеством пар оснований или без них с 3′-концом либо miR-4 , либо miR-79 (см. ниже). Выравнивание 3′-UTR Brd показывает, что существует небольшая консервативность в сайтах-мишенях miR-4 или miR-79 за пределами последовательности семян, а также нет консервации спаривания с любым 3′-концом miRNA.Это указывает на то, что последовательности, которые могут соединяться с 3′-концом miRNAs, не важны для регуляции, поскольку они, по-видимому, не находятся под селективным давлением. Это делает маловероятным, что еще не идентифицированная Brd box miRNA может образовывать комплекс канонических сайтов.

3′-UTR гена HOX Редуцированные половые гребни (Scr) представляют собой хороший пример 3′-компенсаторного сайта. Scr содержит один сайт для miR-10 с 5-мерным начальным числом и непрерывной комплементарностью 11 пар оснований к 3′-концу микроРНК [28].Транскрипт miR-10 кодируется в том же кластере HOX ниже по течению от Scr, ситуация, которая напоминает отношения между miR-iab-5p и Ultrabithorax у мух [26] и miR-196 / HoxB8 у мышей [41]. Предсказанное спаривание между miR-10 и Scr полностью консервативно во всех шести геномах дрозофилид, с единственными различиями в последовательности, происходящими в области непарной петли. Сайт также консервативен в 3′-UTR генов Scr у комара, Anopheles gambiae, мучного жука, Tribolium castaneum и шелкопряда Bombyx mori.Сохранение такой высокой степени 3′-комплементарности на протяжении сотен миллионов лет эволюции позволяет предположить, что это, вероятно, функциональный сайт-мишень miR-10 . Обширная консервативность 5′- и 3′-последовательности также наблюдается для других 3′-компенсаторных сайтов, например, двух сайтов let-7 в lin-41 или сайтов miR-2 в grim и серпа . [17,26,36].

3′-конец миРНК определяет специфичность мишени в семействах миРНК

Было идентифицировано несколько семейств микроРНК, члены которых имеют общие 5′-последовательности, но отличаются своими 3′-концами.Принимая во внимание доказательства того, что 5′-концы миРНК функционально важны [26, 27, 29, 42], а в некоторых случаях достаточны (настоящее исследование), можно ожидать, что члены семейств миРНК могут иметь избыточные или частично избыточные функции. . Согласно нашей модели, 5′-доминантные канонические и seed-сайты должны отвечать на все члены данного семейства miRNA, тогда как 3′-компенсаторные сайты должны различаться по своей чувствительности к разным членам семейства miRNA в зависимости от степени комплементарности 3′. Мы проверили это с помощью анализа крыловых дисков с репортерными трансгенами 3’UTR и конструкциями сверхэкспрессии для различных членов семейства miRNA.

миР-4 и миР-79 имеют общую 5′-последовательность, которая комплементарна одному 8-мерному затравочному сайту в 3′ UTR волынки (рис. 5А и 5В). 3′-концы микроРНК различаются. Прогнозируется, что miR-4 будет иметь 3′-спаривание примерно на 50% от максимально возможного уровня (-10,8 ккал/моль), тогда как уровень 3′-спаривания для miR-79 составляет приблизительно 25% максимума (-6,1 ккал/моль). ккал/моль), что ниже среднего уровня, ожидаемого для случайных совпадений (см. ниже).Обе микроРНК подавляли экспрессию репортера 3’UTR волынки , независимо от 3′-комплементарности (фиг. 5B). Это указывает на то, что оба типа сайтов функциональны in vivo, и указывает на то, что волынка является мишенью для обеих miRNAs в этом семействе.

Рисунок 5. Целевая специфичность членов семейства микроРНК

(A) Диаграммы сохранения 3′-UTR в шести геномах дрозофилид (горизонтальные черные столбцы) и расположение предполагаемых целевых сайтов микроРНК. Выше представлена ​​3′-UTR миогенного транскрипционного фактора волынка (bap) , показывающая предполагаемый сайт-мишень для семейства микроРНК Brd box, miR-4 и miR-79 (черный ящик под UTR).Выравнивание miR-4 и miR-79 показывает, что они имеют сходную затравочную последовательность (за исключением того, что miR-4 имеет одно дополнительное 5′-основание), но имеют небольшое сходство 3′-конца. Ниже представлены консервативные последовательности в 3′-UTR проапоптотических генов grim и серпа. Прогнозируемые сайты-мишени для миРНК K Box miR-11, miR-2b, и miR-6 показаны ниже UTR. Выравнивание miR-11, miR-2b, и miR-6 показывает, что они имеют один и тот же семейный мотив, но имеют небольшое сходство в своих 3′-концах.

(B) Репортерный ген 3’UTR волынки (bap) регулируется миР-4 и миР-79. Выравнивание двух микроРНК с предсказанным сайтом-мишенью показывает хорошие совпадения 8-мерного начального числа (слева). Сверхэкспрессия миР-4 или миР-79 под контролем ptcGal4 подавляла репортер волынки 3′ UTR (справа).

(C) Слева: выравнивание микроРНК K-бокса с одним предсказанным сайтом в 3′-UTR grim и регуляция путем сверхэкспрессии miR-2 (вверху), но не miR-6 (в центре) или miR-11 (внизу).Справа: выравнивание микроРНК K-бокса с двумя предсказанными сайтами в 3′-UTR серпа . Регуляция сверхэкспрессией миР-2 была сильной (вверху), регуляция миР-6 была слабее (в середине), а миР-11 имела незначительный эффект (внизу).

(D) Влияние клонов клеток, лишенных dicer-1 , на экспрессию репортеров UTR для предсказанных генов, регулируемых миРНК. Мутантные клетки были отмечены отсутствием экспрессии β-Gal (красный). Экспрессия EGFP показана зеленым цветом.Оба канала показаны ниже отдельно в черно-белом цвете. Мутантные клоны обозначены желтыми стрелками. Экспрессия однородно транскрибируемой репортерной конструкции, лишенной сайтов-мишеней микроРНК, не изменялась в мутантных клетках dicer-1 (первая колонка). Репортер UTR для миРНК-мишени bantam hid повышался в мутантных клетках (второй столбец). Репортер UTR волынки (bap) повышал экспрессию в клонах dicer-1 (третий столбец). мрачных (четвертая колонка) и серповидных (пятая колонка) репортеров UTR были усилены.

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.0030085.g005

Чтобы проверить, могут ли члены семейства miRNA также иметь неперекрывающиеся мишени, мы использовали 3′-UTR репортеры проапоптотических генов grim и Sickle, , две недавно идентифицированные мишени miRNA [26]. Оба гена содержат K-боксы в своих 3′-UTR, которые комплементарны 5′-концам семейства miR-2, miR-6, и miR-11 miRNA [26,32]. Эти микроРНК имеют общие остатки 2–8, но значительно различаются по своим 3′-областям (рис. 5А).Предполагается, что сайт в 3′-UTR grim образует 6-мерное начальное совпадение со всеми тремя микроРНК (рис. 5C, слева), но только miR-2 демонстрирует обширную 3′-комплементарность, которая, по нашим прогнозам, необходима для 3′-компенсаторный сайт с 6-мерным семенем для функционирования (-19,1 ккал/моль, 63% максимум 3′-спаривания, по сравнению с -10,9 ккал/моль, максимум 46%, для miR-11 и -8,7 ккал/моль, 37% максимум, для miR-6 ). Действительно, только miR-2 была способна регулировать grim 3′-UTR репортер, тогда как miR-6 и miR-11 были нефункциональными.

Серп 3’UTR содержит два блока K и дает возможность проверить, могут ли слабые сайты функционировать синергетически. Первый сайт подобен 3′-UTR grim в том, что он содержит 6-членное начальное число для всех трех miRNAs, но экстенсивную 3′-комплементарность только с miR-2 . Второй сайт содержит 7-мерное семя для miR-2 и miR-6 , но только 6-мерное семя для miR-11 (рис. 5C, справа). миР-2 сильно подавляла репортер серпа , миР-6 обладала умеренной активностью (предположительно через сайт 7mer seed), а миР-11 почти не имела активности, даже несмотря на сверхэкспрессию микроРНК.Тот факт, что сайт является мишенью по крайней мере для одной микроРНК, свидетельствует о том, что он доступен (например, miR-2 способен регулировать оба репортера UTR), и что отсутствие регуляции для других членов семейства связано с дуплексной структурой. . Эти результаты соответствуют тому, что мы ожидали на основе предсказанной функциональности отдельных сайтов, и указывают на то, что наша модель функциональности целевого сайта может быть расширена до UTR с несколькими сайтами. Слабые сайты, которые не работают поодиночке, также не работают в сочетании.

Чтобы показать, что уровни эндогенных miRNA регулируют все три репортера 3’UTR, мы сравнили экспрессию EGFP в клетках дикого типа и мутантных клетках dicer-1 , которые неспособны продуцировать miRNAs [14]. Клоны dicer-1 не влияли на контрольный репортер, не имеющий сайтов связывания миРНК, но демонстрировали повышенную экспрессию репортера, содержащего 3′-UTR ранее идентифицированной миРНК bantam мишени hid (рис. 5D). Сходным образом, все вышеперечисленные 3′-UTR репортеры активировались в мутантных клетках dicer-1 , что указывает на то, что волынка, серп, и grim подвергаются репрессии с помощью микроРНК, экспрессируемых в крыловом диске.Взятые вместе, эти эксперименты показывают, что транскрипты с 5′-доминантными каноническими и начальными сайтами, вероятно, регулируются всеми членами семейства miRNA. Однако транскрипты с 3′-компенсаторными сайтами могут различать членов семейства miRNA.

Полногеномная встречаемость сайтов-мишеней

Экспериментальные тесты, такие как представленные выше, и наблюдаемая эволюционная консервация предполагают, что все три типа сайтов-мишеней, вероятно, будут использоваться in vivo. Чтобы получить дополнительные доказательства, мы исследовали появление каждого типа сайтов во всех 3′-UTR Drosophila melanogaster.Мы использовали геном D. pseudoobscura, второй собранный геном дрозофилид, чтобы определить степень консервативности сайтов для трех разных классов сайтов при выравнивании ортологичных 3′-UTR. Из 78 известных микроРНК Drosophila мы выбрали набор из 49 микроРНК с неповторяющимися 5′-последовательностями. Сначала мы исследовали, являются ли последовательности, комплементарные 5′-концам микроРНК, более консервативными, чем можно было бы ожидать для случайных последовательностей. Для каждой микроРНК мы построили когорту из десяти случайно перемешанных вариантов.Чтобы избежать систематической ошибки в отношении количества возможных совпадений мишеней, перетасованные варианты должны были получить количество совпадений последовательностей, сравнимых (± 15%) с исходными микроРНК для 3′-UTR D. melanogaster. 7-мерные и 8-мерные семена, комплементарные 5′-концам настоящей микроРНК, сохранялись значительно лучше, чем те, которые комплементарны перетасованным вариантам. Это согласуется с выводами Lewis et al. [27], но было получено без необходимости использования порога ранга и энергии, применяемого к полноразмерному целевому дуплексу miRNA, как в случае miRNAs позвоночных.Консервативные 8-мерные семена для настоящих микроРНК встречаются в среднем в 2,8 раза чаще, чем семена, комплементарные перетасованным микроРНК (рис. 6А). Для 7-мерных затравок этот сигнал был 2:1, тогда как 6-мерные, 5-мерные и 4-мерные затравки не показали лучшей консервативности, чем ожидалось для случайных последовательностей. Чтобы оценить достоверность этих сигналов и контролировать случайную перетасовку микроРНК, мы повторили эту процедуру с «мутантными» микроРНК, в которых были заменены два остатка в 5′-области. Не было никакой разницы между мутантными тестовыми миРНК и их перетасованными вариантами (рис. 6А).Это указывает на то, что значительная часть консервативных 7-мерных и 8-мерных семян, комплементарных реальным miRNAs, идентифицирует биологически релевантные сайты-мишени.

Рисунок 6. Вычислительный анализ встречаемости целевого сайта

(A) Полногеномная встречаемость консервативных 5′-семенных совпадений. Гистограмма, показывающая соотношение совпадений 5′-затравки для набора из 49 5′-неперекрывающихся миРНК и среднее значение их десяти полностью перемешанных вариантов для разных типов затравки (черные столбцы). Соотношение, равное единице (красная линия), указывает на отсутствие различий между микроРНК и ее перетасованными вариантами.Такое же соотношение для мутированных микроРНК и их перетасованных вариантов не показывает сигнала (белые столбцы). На вставке показано перетасовка всей последовательности микроРНК (волнистая фиолетовая линия).

(B) Сохранение целевого участка между D. melanogaster и D. pseudoobscura. Гистограмма, показывающая среднюю консервативность последовательности 3′-UTR (16 нуклеотидов) выше консервативного совпадения 8-мерного семени, которое будет спариваться с 3′-концом миРНК. Все сайты были объединены в ячейки в соответствии с их консервативностью, и процент сайтов в каждой ячейке показан для сайтов, идентифицированных 49 5′-неизбыточными последовательностями микроРНК (серые) и их перемешанными контрольными последовательностями (черные, полосы ошибок указывают одно стандартное отклонение).

(C) Предпочтения в спаривании 3′ для сайтов-мишеней miR-7 . Гистограмма, показывающая распределение энергий 3′-спаривания для miR-7 (красные столбцы) и среднее значение для 50 перетасованных 3′-вариантов (черные столбцы) для всех сайтов, идентифицированных по всему геному с помощью 6-мерных 5′-семенных совпадений для miR-7 . На вставке показано перетасовка только 3′-конца последовательности микроРНК (волнистая фиолетовая линия). Поскольку 5′-конец миРНК не был изменен, идентичный набор сайтов-мишеней сравнивали для спаривания с 3′-концом настоящей и перетасованной миРНК.

(D) Предпочтения в спаривании 3′ для сайтов-мишеней микроРНК. Гистограммы, показывающие отношение 1% верхних энергий 3′-спаривания для набора из 58 3′-неизбыточных миРНК и их перетасованных вариантов. По оси Y показано количество микроРНК для каждого соотношения. Реальные микроРНК показаны красным; мутантные микроРНК показаны черным цветом. Слева показаны комбинированные 8- и 7-мерные затравочные сайты. Справа показаны комбинированные 5- и 6-мерные затравочные сайты. Для объединенных 8- и 7-мерных семян 1% соответствует примерно десяти сайтам на микроРНК; для комбинированных 6- и 5-меров примерно до 25 сайтов.Разница между настоящими и мутированными микроРНК улучшается, если учитывать меньшее количество сайтов на микроРНК.

(E) Неслучайный сигнал 3′-спаривания. График соотношения количества сайтов-мишеней для набора из 58 3′-неперекрывающихся миРНК и их перетасованных 3′-концов миРНК (ось Y) с энергиями спаривания 3′, которые превышают заданное пороговое значение спаривания (ось x). 100% — это энергия спаривания для последовательности, полностью комплементарной 3′-концу. Поскольку требуемый уровень энергии 3′-спаривания увеличивается, остается меньше miRNAs и их сайтов, которые вносят свой вклад в сигнал.Графики для настоящих микроРНК расширялись до значительно более высоких энергий спаривания 3′, чем у мутантов, но по мере уменьшения количества сайтов мы наблюдаем аномальные эффекты на отношения, поэтому кривые обрезались, когда количество оставшихся микроРНК падало ниже пяти.

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.0030085.g006

3′-компенсаторные и канонические сайты зависят от существенного спаривания с 3′-концом микроРНК. Мы ожидаем, что для этих сайтов последовательности UTR, соседние с 5′-концом miRNA, лучше сочетаются с 3′-концом miRNA, чем со случайными последовательностями.Однако, в отличие от 5′-комплементарности, предпочтение спаривания 3′-нуклеотидов не было обнаружено в предыдущих исследованиях, посвященных комплементарности последовательностей и сохранению нуклеотидов, потому что последовательности UTR, комплементарные 3′-концу микроРНК, не были лучше сохранены, чем можно было бы ожидать при случайной выборке [27].

На этом основании мы решили рассматривать 5′- и 3′-концы микроРНК отдельно. Для 5′-конца семенные совпадения должны были полностью сохраняться в выравнивании ортологичных 3′-UTR D. melanogaster и D. pseudoobscura (мы ожидали, что от половины до двух третей этих совпадений будут настоящими сайтами микроРНК).Сначала мы исследовали общую консервативность последовательностей UTR, прилегающих к консервативным совпадениям семян, и обнаружили, что в целом последовательности не лучше сохраняются, чем случайный контроль с перетасованными микроРНК (рис. 6B). Как для реальных, так и для случайных совпадений количество сайтов увеличивается со степенью консервативности 3′ (до уровня 80%), отражая повышенную вероятность того, что последовательности, соседние с консервативными начальными совпадениями, также будут лежать в блоках консервативной последовательности (рис. 6B). ). Для настоящих 7-меров и 8-меров мы обнаружили несколько более высокий процент сайтов с идентичностью от 30% до 80%, чем для перетасованных контролей.Напротив, доля сайтов с идентичностью последовательности более 80% была меньше для настоящих 7- или 8-меров, чем для случайных, а это означает, что в высококонсервативных блоках 3′-UTR (>80% идентичности) доля случайных совпадений превышает долю реальных. Сайты-мишени микроРНК. Это заставило нас задаться вопросом, коррелирует ли степень консервативности последовательностей, прилегающих к семенным совпадениям, с 3′-спариванием miRNA, как можно было бы ожидать, если бы консервативность была обусловлена ​​биологически релевантным сайтом-мишенью miRNA. Действительно, мы обнаружили, что наиболее хорошо сохранившиеся участки, примыкающие к семенным матчам (т.т. е. сайты с нулем, одним или двумя несовпадениями в выравнивании 3′-UTR) и наименее консервативные сайты (т. е. сайты только с тремя, двумя или одним совпадающим нуклеотидом) неразличимы в том смысле, что оба только случайным образом соединяются с соответствующий 3′-конец микроРНК (приблизительно 35% максимальной энергии 3′-спаривания, данные не показаны). Наблюдение, что сайты-мишени miRNA, по-видимому, не полностью консервативны по всей их длине, согласуется с примерами, показанными на рисунке 4, в которых сохраняется только степень 3′-спаривания, но не нуклеотидная идентичность (miR-7/волосатые) , или, по крайней мере, непарная выпуклость, по-видимому, не находится под эволюционным давлением (miR-10/Scr). Хотя этот результат, очевидно, зависит от эволюционного расстояния рассматриваемых видов (см. [43] для сравнения сайтов млекопитающих), он показывает, что выводы о вкладе 3′-спаривания микроРНК в функцию сайта-мишени не могут быть сделаны исключительно из степень сохранения последовательности.

Поэтому мы решили оценить качество 3′-спаривания по стабильности предсказанного дуплекса РНК-РНК. Мы оценили прогнозируемую энергию спаривания между 3′-концом микроРНК и соседней последовательностью UTR для обоих видов Drosophila и использовали более низкую оценку.Использование более низкого балла измеряет сохранение общей степени спаривания, не требуя идентичности последовательности. На рисунке 6C показано распределение энергий 3′-спаривания для всех консервативных 3′-компенсаторных сайтов miR-7 , идентифицированных с помощью 6-мерного начального совпадения, по сравнению с распределением 50 последовательностей miR-7 , перемешанных только в 3′-части. оставив 5′ без изменений. Это означает, что настоящие и перетасованные микроРНК идентифицируют одни и те же 5′-затравочные совпадения в 3′-UTR, что позволяет нам сравнивать характеристики 3′-спаривания соседних последовательностей.Мы также требовали, чтобы 3′-перетасованные последовательности имели энергию спаривания (±15%), аналогичную их комплементарным последовательностям, и чтобы 10 000 случайно выбранных сайтов исключали обычно измененные характеристики спаривания. Распределения для настоящих и перетасованных микроРНК были очень похожими, в среднем примерно 35% от максимальной энергии 3′-спаривания и несколько сайтов выше 55%. Однако небольшое количество сайтов исключительно хорошо сочетались с miR-7 при энергиях, которые были намного выше перетасованных средних и не были достигнуты ни одним из 50 перетасованных контролей.Этот пример показывает, что существует значительная разница между настоящими и перетасованными микроРНК для сайтов с наивысшей 3′-комплементарностью, которые, вероятно, являются биологически релевантными. Сайты с более слабым 3′-спариванием также могут быть функциональными, но их нельзя отличить от случайных совпадений, и их можно подтвердить только экспериментами (см. рис. 5). Чтобы обеспечить глобальный анализ 3′-спаривания, включающего все микроРНК, и выяснить, сколько микроРНК демонстрируют значительно неслучайное 3′-спаривание, мы рассмотрели только сайты в пределах 1% самых высоких энергий 3′-спаривания.

Среднее значение 1% самых высоких энергий 3′-спаривания каждой из 58 3′-неперекрывающихся микроРНК было разделено на среднее значение 50 3′-перетасованных контролей. Это отношение равно единице, если средние значения одинаковы, и увеличивается, если настоящая микроРНК имеет лучшее 3′-спаривание, чем перетасованные микроРНК. Чтобы проверить, был ли сигнал специфичным для настоящих микроРНК, мы повторили тот же протокол с мутантной версией каждой микроРНК. Измененная 5′-последовательность в мутантной miRNA выбирает другие совпадения семян, чем реальная miRNA, и позволяет сравнивать последовательности, которые не подвергались селекции на комплементарность 3′-концам miRNA, с теми, которые могли пройти.На рисунке 6D показано распределение отношений энергий для канонических (слева) и 3′-компенсаторных сайтов (справа) для всех 58 настоящих и мутантных 3′-неизбыточных миРНК. Большинство настоящих микроРНК имели отношения, близкие к единице, что сравнимо с мутантами. Но некоторые из них имеют отношения намного выше наблюдаемых для мутантных miRNAs, указывая на значительное консервативное 3′ спаривание.

Небольшая часть сайтов демонстрирует исключительно хорошие 3′-спаривания. Если мы используем отсечение энергии 3′-спаривания для проверки качества сайтов для всех miRNAs, мы ожидаем, что сайты этого типа будут отличимы от случайных совпадений.Соотношение количества сайтов выше отсечки для настоящих и 3′-перетасованных микроРНК было построено как функция отсечки 3′-спаривания (рис. 6E). Для низких отсечений отношение равно единице, так как количество сайтов соответствует количеству начальных совпадений (которое идентично для настоящих и перетасованных 3′-миРНК). Для увеличения отсечения отношения увеличиваются, как только достигается определенный порог, отражая чрезмерное представительство сайтов, которые благоприятно сочетаются с 3′-концом настоящей miRNA, но не с 3′-перетасованными miRNAs. Максимальное соотношение, полученное для мутированных микроРНК, никогда не превышало пяти, которые мы использовали в качестве порогового уровня, чтобы определить, где начинается значительное сверхпредставление.Для 8-мерных затравочных сайтов чрезмерное представительство началось при 55% максимального 3′-спаривания; для затравочных участков 7mer — 65%; для 6-мерных семенных участков — 68%; а для 5-мерных затравочных участков — 78%. Статистических данных для сайтов с 4-мерными семенами не было.

Мы также проверили, являются ли последовательности, образующие 7-мерные или 8-мерные затравки, содержащие пары оснований G:U, несовпадения или выпуклости, более консервативными, если они комплементарны реальным микроРНК. Мы не нашли никаких статистических данных для этих типов семян. Анализ 3′-спаривания также не показал какого-либо неслучайного сигнала для этих сайтов.Это говорит о том, что таких сайтов мало по всему геному и их трудно отличить от случайных совпадений. Тем не менее, наши эксперименты показывают, что сайты этого типа могут функционировать in vivo. let-7 сайтов в lin-41 представляют собой естественный пример.

На большинстве сайтов отсутствует существенное 3-футовое соединение

Экспериментальные и расчетные результаты, представленные выше, предоставляют информацию о спаривании 5′ и 3′, что позволяет нам оценить количество сайтов-мишеней каждого типа у Drosophila. Количество 3′-компенсаторных сайтов невозможно оценить на основе 5′-спаривания, потому что исходные совпадения из четырех, пяти или шести оснований нельзя отличить от случайных совпадений, отражая большое количество случайно консервативных и нефункциональных совпадений. преобладают (рис. 6А). Значительное 3′-спаривание можно отличить от случайных совпадений для 6-мерных сайтов с максимальной энергией 3′-спаривания выше 68% и выше 78% для 5-меров (рис. 6Е). Использование этих уровней спаривания дает оценку одного 3′-компенсаторного сайта в среднем на микроРНК.Эксперименты на рис. 5 дают возможность оценить вклад 3′-спаривания в способность сайтов с 6-мерными затравками функционировать. Сайт 6-мерного K-бокса в 3′-UTR grim регулировался miR-2 (63% максимальной энергии 3′-спаривания), но не miR-11, , который имеет предсказанную энергию 3′-спаривания 46 %. Точно так же 6-мерные затравочные сайты для miR-11 в 3′-UTR серпа имели энергию 3′-спаривания приблизительно 35% и были нефункциональными.Мы можем использовать уровни 63% и 46%, чтобы получить верхнюю и нижнюю оценки одного и 20 3′-компенсаторных 6-мерных сайтов в среднем на микроРНК. Для сайтов 5mer примеры на рис. 1 показывают, что сайты с 76% и 83% максимального 3′-спаривания не функционируют. На пороговом уровне 80% мы ожидаем менее одного дополнительного сайта в среднем на микроРНК, предполагая, что 3′-компенсаторные сайты с 5-мерными семенами встречаются редко. Предсказанный сайт miR-10 в Scr (см. Рисунок 4) является одним из немногих сайтов с 5-мерным начальным числом, которое достигает этого порога (100% максимальной энергии 3′-спаривания; -20 ккал/моль).Вполне вероятно, что другие сайты в этой группе также окажутся функционально важными.

Чрезмерное представительство консервативных 5′-семенных совпадений (см. рис. 6A) предполагает, что примерно две трети сайтов с 8-мерными семенами и примерно половина сайтов с 7-мерными семенами являются биологически релевантными. Это соответствует в среднем 28 8-мерам и 53 7-мерам, всего 81 сайт на микроРНК. Мы определяем канонические сайты как сайты со значимым вкладом как от 5′-, так и от 3′-спаривания.Учитывая, что совпадения 7- и 8mer seed могут функционировать без значительного 3′-спаривания, трудно оценить, на каком уровне 3′-спаривание вносит значимый вклад в их функцию. Диапазон энергий 3′-спаривания, которые были минимально достаточными для поддержки слабого начального совпадения, составлял от 46% до 63% от максимальной энергии спаривания (см. Рисунок 5C). Если мы возьмем уровень 46% в качестве нижнего предела значимого 3′-спаривания, более 95% сайтов будут считаться исходными сайтами. Это изменяется до 99% для энергий спаривания, которые можно статистически отличить от шума (максимум 55%; см. Рисунок 6E), и остается более 50% даже для энергий спаривания на среднем уровне, достигнутом случайными совпадениями (максимум 30%).Из этого анализа ясно, что для большинства сайтов-мишеней miRNA не хватает существенного спаривания на 3′-конце в близлежащих последовательностях. Действительно, уровень 3′-спаривания для трех исходных сайтов для miR-4 в Brd составляет менее 25% (т.е. ниже среднего для случайных совпадений), и поэтому Brd не был предсказан как miR- 4 цель ранее [26,28,35].

Опять же, мы отмечаем предостережение о том, что некоторые сайты, которые мы идентифицируем как исходные, в принципе могут поддерживаться 3′-спариванием с более удаленными восходящими последовательностями, но также и то, что такие сайты будет трудно отличить от фона с помощью вычислений, и что неясно, большие петли функциональны.Если бы имелись статистические данные о том, что 3′-спаривание ниже, чем можно было бы ожидать случайным образом для некоторых сайтов, это было бы одним из аргументов в пользу дискретного функционального класса, который не использует 3′-спаривание, и, следовательно, предполагал бы отбор против 3′-спаривания. . Хотя общее распределение энергий 3′-спаривания для 3′-концов реальной микроРНК, примыкающих к 8-мерным затравочным совпадениям, очень похоже на случайный контроль с перетасованными 3′-последовательностями (рис. 7; R 2 = 0,98), мы наблюдали небольшое но значительное перепредставление реальных сайтов по обеим сторонам случайного распределения, что приводит к несколько более широкому распределению реальных сайтов за счет пиковых значений около 30% спаривания.Принимая во внимание, что одна треть начальных совпадений 8mer являются ложными срабатываниями (см. Рисунок 6A), мы можем объяснить шум, вычитая одну треть случайного распределения. Затем мы видим два пика при максимальной энергии спаривания около 20% и 35%, разделенные провалом. Вычитание большего количества (например, половины или двух третей) случайного распределения увеличивает разделение двух пиков, предполагая, что основное распределение 3′-спаривания для реальных 8-мерных затравочных сайтов действительно может быть бимодальным. Этот эффект все еще присутствует, хотя и менее выражен, если включены 7-мерные начальные совпадения.Для комбинированных 5- и 6-мерных начальных совпадений такого эффекта не наблюдается. Кроме того, мы не видим различий между случайной (шумовой) моделью, которая оценивает 3′-спаривание 3′-перетасованных миРНК с сайтами UTR, идентифицированными реальными начальными совпадениями миРНК, и случайной моделью, которая спаривает настоящие (т.е. не перетасованные) миРНК 3 ‘ заканчиваются случайно выбранными последовательностями UTR, что исключает систематическую ошибку из-за перетасовки. В целом, эти результаты предполагают, что действительно может быть бимодальное распределение из-за обогащения сайтов как с лучшим, так и с худшим 3′-спариванием, чем можно было бы ожидать случайным образом.Мы принимаем это как доказательство того, что семенные сайты являются биологически значимой подгруппой в пределах категории 5’-доминантных сайтов.

Рис. 7. Распределение энергии 3′-спаривания для 8-мерных совпадений

Показано распределение (количество сайтов по сравнению с 3′-спариванием) для 8-мерных совпадений, идентифицированных по всему геному для 58 3′-неперекрывающихся миРНК (черные) по сравнению с случайный контроль с использованием 50 3′-перетасованных миРНК на настоящую миРНК (серый). Обратите внимание, что распределение для реальных микроРНК шире как на верхнем, так и на нижнем уровне, чем в случайном контроле, и имеет плечи, близкие к пику.Красная, синяя и зеленая кривые показывают эффект вычитания фонового шума (случайных совпадений) из реальных совпадений на трех разных уровнях, что показывает реальные совпадения, лежащие в основе этих плеч.

https://doi.org/10.1371/journal.pbio.0030085.g007

В целом, эти оценки предполагают, что существует более 80 5′-доминантных сайтов и 20 или меньше 3′-компенсаторных сайтов на микроРНК в геноме дрозофилы . Поскольку оценки количества miRNAs у Drosophila колеблются от 96 до 124 [44], это соответствует 8000-12000 сайтов-мишеней miRNA по всему геному, что близко к количеству белок-кодирующих генов.Даже учитывая тот факт, что некоторые гены имеют множественные сайты-мишени miRNA, эти находки указывают на то, что большая часть генов регулируется miRNAs.

Обсуждение

Мы предоставили экспериментальные и расчетные данные для различных типов сайтов-мишеней микроРНК. Одним из ключевых открытий является то, что сайты всего лишь с семью парами оснований комплементарности 5′-концу miRNA достаточны для обеспечения регуляции in vivo и используются в биологически релевантных мишенях. Полногеномные 5′-доминантные сайты встречаются в 2-3 раза чаще в консервативных последовательностях 3′-UTR, чем можно было бы ожидать случайным образом.Большинство этих сайтов были упущены из виду предыдущими методами прогнозирования мишеней miRNA, потому что их ограниченная способность образовывать пары оснований с 3′-концом miRNA не может быть отличена от случайного шума. Такие сайты занимают низкие позиции в поисковых методах, предназначенных для оптимизации общей энергии спаривания [16,17,26,27,28,30,35]. Действительно, мы обнаруживаем, что лишь немногие исходные сайты получили достаточно высокие оценки, чтобы их можно было серьезно рассматривать в этих более ранних предсказаниях, даже когда 5′-комплементарности придавался дополнительный вес (например, [28, 43]. Таким образом, мы подозреваем, что методы с отсечкой спаривания исключат многие , если не все, такие сайты.

В сценарии, при котором гены, кодирующие белок, приобретают сайты-мишени miRNA в ходе эволюции [4], вполне вероятно, что начальные сайты только с семью или восемью основаниями, комплементарными miRNA, будут первыми приобретаемыми функциональными сайтами. Однажды представленный сайт будет сохранен, если он дает преимущество, и сайты с расширенной комплементарностью также могут быть выбраны для обеспечения более сильной репрессии. В этом сценарии количество сайтов может расти в ходе эволюции, так что у древних miRNA будет больше мишеней, чем у тех, которые эволюционировали недавно.Сходным образом, гены, которые не должны быть репрессированы средой miRNA в данном типе клеток, будут склонны избегать семенных совпадений с 5′-концами miRNA («анти-мишени» [4]).

Хотя для функционирования сайта достаточно 7-8-мерного начального числа, дополнительное 3′-спаривание увеличивает функциональность miRNA. Ожидается, что активность одного 7-мерного канонического сайта будет выше, чем у эквивалентного затравочного сайта. Сходным образом величина репрессии, индуцированной miRNA, уменьшается за счет введения 3′-мисматчей в канонический сайт.Во всем геноме есть много сайтов, которые, по-видимому, демонстрируют отбор на консервативное 3′-спаривание и, что интересно, многие сайты, по-видимому, демонстрируют отбор против 3′-спаривания. In vivo канонические сайты могут функционировать при более низких концентрациях miRNA и могут более эффективно репрессировать трансляцию, особенно когда несколько сайтов присутствуют в одной UTR (например, [42]). Эффективная репрессия, вероятно, необходима для генов, чья экспрессия была бы вредной, как показано на генетически идентифицированных miRNAs, которые производят явные мутантные фенотипы, когда их мишени обычно не репрессированы («switch target» [4]).Продолжительная экспрессия генов lin-14 и lin-41 у Caenorhabditis elegans, мутантных по lin-4 или let-7 , вызывает дефекты развития, и их регуляция включает несколько сайтов [17,36,37]. Сходным образом, множественные сайты-мишени обеспечивают надежную регуляцию проапоптотического гена hid с помощью bantam miRNA у Drosophila [19]. Более тонкая модуляция уровней экспрессии может выполняться более слабыми сайтами, такими как те, в которых отсутствует 3′-спаривание.Сайты, которые не могут эффективно функционировать сами по себе, фактически являются предпосылкой для комбинаторной регуляции с помощью множества miRNAs. Seed сайты, таким образом, могут быть полезны для ситуаций, в которых комбинированный ввод нескольких miRNAs используется для регуляции экспрессии мишени. В зависимости от природы сайтов-мишеней, любая отдельная miRNA может не оказывать сильного эффекта сама по себе, хотя и необходима в контексте других.

3′-комплементарность отличает членов семейства микроРНК

3′-компенсаторные сайты имеют слабое 5′-спаривание и нуждаются в существенном 3′-спаривании для функционирования.Мы находим статистическую поддержку 3′-компенсаторных сайтов с 5-мерными и 6-мерными семенами для всего генома и показываем, что они используются in vivo. Кроме того, эти сайты могут по-разному регулироваться разными членами семейства микроРНК в зависимости от качества их 3′-спаривания (например, регуляция проапоптотических генов grim и серпа с помощью miR-2, miR-6, ). и miR-11 ). Т.о., члены семейства miRNA могут иметь как общие мишени, так и различные мишени. Они могут быть функционально перекрывающимися в регуляции одних мишеней, но не других, поэтому мы можем ожидать некоторых перекрывающихся фенотипов, а также различий в их мутантных фенотипах.

Следуя этим рассуждениям, вполне вероятно, что члены семейства let-7 miRNA по-разному регулируют lin-41 у C. elegans [17,45]. Исходные совпадения в lin-41 с let-7 и родственными микроРНК miR-48, miR-84, и miR-241 являются слабыми, и только let-7 имеет сильное 3′-спаривание. . Исходя из этого, представляется вероятным, что лин-41 регулируется только лет-7 . Напротив, hbl-1 имеет четыре сайта с сильным совпадением семян [38,39], и мы ожидаем, что он будет регулироваться всеми четырьмя членами семейства let-7 .Поскольку все четыре let-7 -родственных miRNAs сходно экспрессируются во время развития [6], их роль в качестве регуляторов hbl-1 может быть избыточной. лет-7 также должен иметь цели, не разделяемые другими членами семьи, так как его функция имеет важное значение. лин-41 , вероятно, будет одной из таких целей.

Идея о том, что 3′-конец микроРНК служит фактором специфичности, обеспечивает привлекательное объяснение наблюдения, что многие микроРНК консервативны по всей своей длине у видов, разделенных несколькими сотнями миллионов лет эволюции.3′-компенсаторные сайты, возможно, произошли от канонических сайтов в результате мутаций, которые снижают качество совпадения семян. Это может давать преимущество, позволяя сайту по-разному регулироваться членами семейства miRNA. Кроме того, сайты могут сохранять специфичность и общую энергию спаривания, но с пониженной активностью, что, возможно, позволяет различать высокие и низкие уровни экспрессии miRNA. Это может также позволить гену-мишени приобрести зависимость от входных данных от множества miRNAs. Эти сценарии иллюстрируют несколько способов, которыми более сложные регуляторные роли miRNAs могут возникать в ходе эволюции.

Большая часть генома регулируется микроРНК

Другим интригующим результатом этого исследования является доказательство удивительно большого количества сайтов-мишеней miRNA по всему геному. Даже наша консервативная оценка намного превышает количество сайтов в недавних предсказаниях, например, семь или меньше на микроРНК [27,28,29]. Наша оценка общего числа мишеней приближается к количеству кодирующих белок генов, указывая на то, что регуляция экспрессии генов с помощью miRNAs играет большую роль в биологии, чем предполагалось ранее.Действительно, Bartel и Chen [46] в недавнем обзоре предположили, что более ранние оценки, вероятно, были занижены, а недавнее исследование John et al. [43], опубликованные во время рецензирования этой рукописи, предсказывают, что примерно 10% генов человека регулируются микроРНК. Мы согласны с предположением этих авторов, что это, вероятно, заниженная оценка, т.к. их метод идентифицирует в среднем только 7.1 генов-мишеней на микроРНК, с немногими, которые мы бы классифицировали как начальные сайты, лишенные существенного 3′ спаривания.Большое количество сайтов-мишеней на miRNA также согласуется с комбинаторной регуляцией генов miRNAs, аналогичной регуляции транскрипционными факторами, что приводит к специфичной для типа клеток экспрессии генов [47]. Сайты для множественных miRNAs допускают возможность комбинаций miRNA, специфичных для типа клеток, для обеспечения надежной и специфической регуляции генов.

Наши результаты обеспечивают лучшее понимание некоторых важных параметров, определяющих, как miRNAs связываются со своими генами-мишенями. Мы ожидаем, что это будет полезно для понимания известных взаимосвязей miRNA-мишень и для улучшения методов предсказания мишеней miRNA.Мы ограничили нашу оценку целевыми сайтами в 3′ UTR. miRNAs, направленные на другие типы мишеней или с резко отличающимися функциями (например, в регуляции структуры хроматина), вполне могут использовать разные правила. Соответственно, может оказаться, что целей больше, чем мы можем сейчас оценить. Кроме того, могут быть дополнительные функции, такие как общий контекст UTR, которые улучшают или ограничивают доступность предсказанных сайтов и, следовательно, их способность функционировать. Например, правила о структуре сайта-мишени не могут объяснить очевидное требование к линкерной последовательности, наблюдаемое в регламенте let-7/lin-41 [48].Можно ожидать, что дальнейшие усилия по экспериментальной проверке сайта-мишени и систематического изучения характеристик UTR дадут новое представление о функции сайтов-мишеней miRNA.

Легенда о Ленни | The New Yorker

В 1984 году, когда мне было пятнадцать и я жил в Вашингтоне, округ Колумбия, я зашел в Национальный собор, чтобы посмотреть, как Леонард Бернстайн дирижирует Второй симфонией Густава Малера «Воскресение». Бернштейн готовился к концерту, спонсируемому организацией «Музыканты против ядерного оружия», или MANA .Я мало верил, что он предотвратит Армагеддон, дирижируя Малером, но тем не менее боготворил его. Партитура симфонии лежала на скамье, и я таращился на букву «LB», нацарапанную на титульном листе. В течение нескольких минут Бернстайн был занят двумя рокочущими перкуссионными крещендо, которые напоминают раскол земли на Страшном Суде. «Громче! Громче!» он продолжал кричать, его рев был образцом для игроков. Позже я следовал за ним на почтительном расстоянии, пока он исследовал склепы под собором и поднимался по узкой извилистой лестнице в центральную башню.Когда он открыл для себя карильон, он весело заиграл заключительную тему «Жар-птицы» Стравинского. Как и многие люди в конце двадцатого века, я был маленьким объектом, склонившимся к жизни в музыке благодаря гравитационному притяжению блуждающей планеты Бернштейн.

Бернштейн дирижирует Бостонским симфоническим оркестром в исполнении симфонии Малера «Воскресение» в Тэнглвуде, 1970 год. Фотография из UPI / Landov

Больше, чем человек, я помню звук и ощущение силы, которое производил звук.Долгое время я не был уверен, действительно ли Бернштейн совершил что-то эпохальное или он просто открыл эпоху в моем сознании. На днях, разыскивая в Интернете информацию об этом выступлении, я наткнулся на запись его трансляции, которую кто-то в Японии оцифровал. Качество звука было немного отрывочным, а игра временами грубой (оркестр был специальной группой, собранной из Национального симфонического оркестра и Балтиморского симфонического оркестра), но интенсивность осталась.В кульминации первой части медные духовые развязывают воинственные аккорды, которые становятся устрашающе диссонирующими, в то время как в остальной части оркестра гаммы перемалываются вниз. Последовательность заканчивается резко падающей октавной фигурой. Я помню, как Бернстайн опустил руки, чтобы произвести его. На записи слышно, как эхо проплывает по нефу собора, словно молот, брошенный с огромной силой.

Этот момент иллюстрирует способность Бернштейна передать почти любую абстрактную последовательность нот или аккордов как физическое действие, потливый человеческий жест.Эффекта трудно добиться. Музыкантов нужно уговорить создать особый вид унисона: не роботизированное единообразие исполнения, а более глубокое единодушие, в котором спонтанные действия со стороны каждого исполнителя интуитивно реализуют видение дирижера. Есть ролики, в которых Бернштейн стремится к тому единодушию, и смотреть на это не всегда приятно. Когда чувство отсутствует, он проявляет раздражение, ярость или, что наиболее тревожно, несчастье, грозящее перерасти в отчаяние.Он говорит членам августейшего Венского филармонического оркестра, что, если они не будут стараться сильнее, «Малера не будет», а затем опускает голову, словно отводя глаза от неслыханного преступления. Обычно все оборачивается. Игроки выстраиваются в шеренгу — в эту дрожащую, мчащуюся шеренгу, в которой Бернштейн казался скорее вдохновенным ведомым, чем лидером. Хотя он купался в славе, он никогда не накапливал власть: каждую ночь он отдавал все, что у него было.

Этой осенью Карнеги-холл совместно с Нью-Йоркским филармоническим оркестром и другими организациями представляет фестиваль под названием «Бернштейн: лучший из всех возможных миров.Бернштейну, умершему в 1990 году, в этом году исполнилось бы девяносто, но повод для вечеринки не нужен. Когда фестиваль завершится на этой неделе камерным концертом, лидеры Карнеги должны поклониться; их серия привела в восторг капризный город. Были показаны фильмы с выступлениями Бернстайна, возрождены его несравненные телевизионные лекции, старые друзья продолжают хвататься за микрофон, чтобы рассказывать Ленни истории. Но фестиваль был больше, чем сумбур ностальгии. Бернстайн, которого долгое время считали удивительно талантливой, но творчески нереализованной фигурой, наконец-то получает заслуженное признание как композитор.Его работа, конечно, неравномерна. В октябре Карнеги возродил «Мессу», популярную деконструкцию христианского ритуала, в которой величайшие достоинства и недостатки Бернстайна сталкиваются в одном неустойчивом соединении. Одни слушатели ушли в восторге, другие в недоумении. И все же в своей буйной странности «Месса» Бернштейна показала, насколько оригинален был этот композитор.

История Бернштейна похожа на современную американскую басню. Удивительный мальчик из Лоуренса, штат Массачусетс, сын иммигрантов из украинских местечек, однажды садится за стул своей тети и начинает делать записи.Через несколько месяцев он переигрывает своего первого учителя игры на фортепиано; за пару лет он освоил «Рапсодию в стиле блюз». Во время учебы в Гарварде он произвел впечатление на дирижеров Дмитрия Митропулоса и Сержа Кусевицкого, приобрел друга на всю жизнь в лице Аарона Копленда и параллельно пишет дипломную работу на афроамериканские темы в классической музыке, которую до сих пор стоит прочитать. Он переезжает в Нью-Йорк в сентябре 1942 года в возрасте двадцати четырех лет и немногим более чем за два года совершает выдающийся тройной подвиг: он завоевывает всеобщее признание как дирижер, когда заменяет Бруно Вальтера в Нью-Йоркском театре. Филармония; он зарекомендовал себя как композитор концертного зала с солидной, невероятно красноречивой Первой симфонией «Иеремия»; а вместе с Бетти Комден и Адольфом Грином он создает популярный мюзикл «В городе».К Дню Победы в 1945 году Бернштейн был одним из самых известных американских художников своего поколения. Недавнее возрождение «On the Town» в центре города, с живым воссозданием некоторых оригинальных танцев Джерома Роббинса, пробудило ликующую энергию, с которой Бернстайн спустился в город, ставший его домом.

За замечательными ранними успехами скрывался ряд кризисов идентичности, которые так и не были разрешены полностью. Посещать фестиваль Бернштейна ночь за ночью означало наблюдать за порой отчаянной борьбой этого человека в поисках подходящего сосуда для своего таланта.В лучшем мире эти конфликты — между классическими и популярными традициями, между сочинением музыки и дирижированием, между институтами высокого искусства и радикальной политикой, между гомосексуальной и гетеросексуальной сексуальностью — не имели бы большого значения. Дух человека, в котором было что-то первобытное, почти животное, преобладал над всеми категориями.

В детстве Бернстайн был всеядным потребителем музыки, в блаженном неведении различий между высоким и низким, элитой и попсой. Он с радостью принимал Гилберта и Салливана, еврейские народные песни, симфонии Бетховена, ноктюрны Шопена, джаз, оперу бельканто, диссонирующий модернизм и более или менее все остальное.Дети склонны слушать именно так — они торжественно распевают рекламные джинглы и головокружительно танцуют под Баха. Гениальность Бернстайна заключалась в том, чтобы никогда не отказываться от своей мальчишеской жадности и сочетать ее с аналитическим пониманием того, как разрозненные стили сочетаются друг с другом. У него была рентгеновская способность воспринимать мелодические родственные связи под звуковыми поверхностями, и в своих амбициозных лекциях Нортона 1973 года он попытался построить глобальный синтаксис музыки по образцу структурной лингвистики Ноама Хомского. Теорию можно разобрать, но композиционная практика Бернстайна до некоторой степени доказывает это.

Однажды октябрьским вечером Джек Готлиб, ассистент Бернстайна в Нью-Йоркской филармонии, выступил с лекцией-концертом в Еврейском музее, на которой он и различные исполнители продемонстрировали связь Бернштейна с еврейскими традициями. В процессе они подчеркнули умение композитора алхимически преобразовывать свой собственный материал. Одна часть программы была посвящена «Чичестерским псалмам», хоровому шедевру Бернштейна 1965 года. Готлиб отметил, что музыка второй части — сочетание псалма 23 («Господь — пастырь мой, я не буду в нужде») с псалмом 2 (« Почему народы бушуют») — во многом вытекает из других проектов.Незадолго до написания «Псалмов» Бернштейн пытался написать мюзикл по мотивам «Кожи наших зубов» Торнтона Уайлдера. Когда проект провалился, он увидел, что один законченный номер, нежно-блюзовый дуэт «Весна снова придет», подходил под слова псалма: «Ветер может подуть» стал «Адонай», «Весна снова придет» стал «Наф». ‘ши й’шовев». Бернштейн также переделал брошенный номер из «Вестсайдской истории», боевую песню под названием «Mix», чтобы создать псалом 2: «Сделай из них беспорядок / Заставь сукины дети платить», мутировавший в «Lamah rag’shu / Lamah». ра-г’-шу гои.Напористо бормочущая музыкальная линия Бернштейна применима в равной мере и к соперничающим бандам, и к разбушевавшимся нациям, которые, в конце концов, являются симптомами одной и той же болезни. Хор Amor Artis и сопрано Хизер Бак спели пьесы в Еврейском музее, и это было похоже на объяснение одного из величайших фокусов в истории.

Умение Бернстайна играть в такие игры вызывает подозрение, что он был просто ловким обманщиком. Но его манипуляции и присвоения служили тщательно рассчитанным выразительным целям.Как продемонстрировал Кент Тритл, дирижируя «Псалтирью» в церкви Св. Игнатия Лойолы в октябре, все эти народные мелодии и уличные ритмы сливаются в атмосферу священной чистоты, своего рода спортивной невинности. В первые годы мастерство Бернштейна было безошибочным. Этой осенью Нью-Йоркский филармонический оркестр представил симфонию «Иеремия», симфонию «Эпоха тревог» и «Серенаду» для скрипки, струнных и перкуссии. Последние два я слышал в выступлениях Лорина Маазеля, нынешнего директора филармонии, и Алана Гилберта, назначенного им преемника.Если ни один из мужчин не уловил аутентичного замаха Бернштейна, работы оказались прежде всего прочными конструкциями. В наши дни, когда композиторы используют компьютерное программное обеспечение для создания множества нот и размытия тембра, раннего Бернштейна можно рассматривать как модель экономии, его большие структуры экстраполируются из основного набора интервалов. «Вестсайдская история», фантазия на тритонах и квинтах («Мари-а!»), остается, конечно, его самым ошеломляющим достижением. С открытием крупного возрождения на следующей неделе в Вашингтоне, Д.э., и прибыв на Бродвей в феврале, ренессанс Бернштейна может продолжаться еще какое-то время после окончания фестиваля Карнеги.

Когда состоялась премьера «Вестсайдской истории», второй кризис Бернштейна — противоречие между сочинением и дирижированием — достиг апогея. За две недели до открытия шоу, в августе 1957 года, Бернштейн подписал контракт, став единственным музыкальным руководителем Нью-Йоркского филармонического оркестра, что более или менее гарантировало, что его творческий потенциал резко упадет. Его давно призывали сделать этот шаг.Еще в 1939 году Копленд и его коллеги-композиторы Рой Харрис и Уильям Шуман разработали план, согласно которому молодой человек должен стать «великим дирижером Америки», как сообщает Хамфри Бертон в своей биографии Бернстайна 1994 года. Старшие композиторы увидели, что он может вывести американскую классическую музыку в мейнстрим. Их не очень беспокоило то, что ему, возможно, придется пожертвовать своим сочинением в процессе. Бернштейн влюбился в дирижирование и с радостью занимался им. Сочинение же, напротив, внушало ему некий ужас, а театральный мир вызывал у него бесконечное разочарование.В июле 1957 года он написал своей жене, чилийско-американской актрисе Фелисии Монтеалегре: « Это последнее шоу, которое я делаю ». Отметив, что контракт с филармонией готов к подписанию, он добавил: «В конце концов, я буду дирижером».

В филармонии Бернштейн возвысил Малера, прославил американских композиторов и попробовал себя в авангарде. Он изменил безвкусный бизнес музыкального образования с помощью своих молодежных концертов, которые транслировались по национальному телевидению. Он написал два бестселлера «Радость музыки» и «Бесконечное разнообразие музыки», которые до сих пор рекомендуются в качестве путеводителей по классическому репертуару.Он и его жена стали приспособленцами общества. Его национальная известность возросла до такой степени, что он стал политической фигурой, объединившись с Кеннеди, а затем выступая против войны во Вьетнаме. Следовательно, между 1957 и 1971 годами Бернштейн создал только два существенных произведения: Симфонию «Каддиш» и «Чичестерские псалмы». «Псалмы» приближаются к совершенству, но «Каддиш», подвергающий слушателей раздутой ссоре с Богом («Отче мой: древний, святой, одинокий, разочарованный Отец»), предполагает рассеянного композитора.Интересно, могли ли еще три или четыре оперы и шоу вроде «Кандида» и «Вестсайдской истории» сделать больше для продвижения американской классической музыки, чем все концерты и радиопередачи Бернштейна вместе взятые?

«Нет, нет, в этом не будет необходимости — они неплохо справляются с собой».

В конце шестидесятых Бернштейн снова попытался исправить баланс. «Я действительно композитор, и у меня нет времени заниматься другой своей работой», — сказал он руководству филармонии в 1966 году.Он провел свой последний концерт в качестве музыкального руководителя оркестра в 1969 году, а на следующий вечер посетил шоу Джими Хендрикса, наслаждаясь бегством от рутины и планируя композиционный второй акт. Его восхищали Beatles и другие группы прогрессивного рока. «Месса», его самое амбициозное творение, уже маячила на горизонте; Джеки Кеннеди заказала работу для открытия Центра исполнительских искусств Кеннеди в Вашингтоне. Но в течение двух лет Бернштейн оказался в гуще новых кризисов, политических и сексуальных, и ни он, ни его семья так и не оправились полностью.

Однажды ночью в 1970 году Фелиция Бернстайн организовала сбор средств от имени двадцати одного члена Партии Черных пантер, которым было предъявлено обвинение в заговоре с целью взорвать здания и убить полицию. Ее муж опоздал с репетиции «Фиделио» Бетховена и, возможно, заряженный рассказом об угнетении и освобождении, вмешался в дискуссию, выразив сочувствие эгалитарным целям «Черных пантер», но задавая вопросы Дональду Коксу, полю пантер. маршал, о склонности группы к насилию.Присутствовали два журналиста: Шарлотта Кертис из Times и Том Вулф из New York . «Если бизнес не даст нам полной занятости, мы должны взять средства производства и передать их в руки людей», — сказал Кокс однажды. По словам Кертиса, Бернштейн ответил: «Я копаю абсолютно». По словам Вулфа, Бернстайн сказал: «Как? Я копаю это! Но как?» Позже Бернстайн пытался объяснить, что Кокс закончил свое заявление словами «Ну что?» и что он просто отвечал тем же.Какими бы ни были подробности, отчеты рисовали неприятную картину: великий дирижер Америки пытается вести переговоры с экстремистами. После публикации статьи Кертиса редакционная страница Times обвинила Бернстайна в «элегантных трущобах» и заявила, что он «высмеивал память Мартина Лютера Кинга-младшего». Протестующие появились у многоквартирного дома Бернштейна. Волны враждебных писем обрушились на пару, а также на их гостей.

Произведение Вульфа, вышедшее под знаменитым названием «Радикальный шик: вечеринка у Ленни», представляло собой демонстрацию силы беспристрастной враждебности, характеризуя Бернштейна как «более чем компетентного композитора», а затем высмеивая его как «великого прерывателя, Деревенский объяснитель, чемпион Mental Jotto, Свободный аналитик, Mr.Давайте узнаем.» Вульф свел страсть Бернштейна к афроамериканской музыке к карикатуре на расовый туризм, выдвигая идею о том, что его объект был навязчиво зациклен на фигуре «негра у фортепиано» (возможно, случай проекции со стороны автора). Фелицию Бернстайн высмеивали за то, что квартира выглядела как «чатка на миллион долларов». Она избегала читать статью, но вряд ли могла не услышать о ней, и этот эпизод произвел на нее разрушительное действие. На панельной дискуссии с членами семьи в Карнеги-холле Джейми Бернстайн, один из трех детей пары, вспоминал: «Было ощущение, что наша мать так и не оправилась от горя и позора этого инцидента.Никто не был полностью счастлив снова».

Когда годы спустя были открыты файлы ФБР, радикальный шик оказался больше, чем случай, когда музыкант выставляет себя на посмешище. Многие из этих гневных писем были составлены сотрудниками контрразведывательной программы Дж. Эдгара Гувера; в одной служебной записке отмечается, что переписка была написана для того, чтобы подчеркнуть «антисемитскую и проарабскую позицию» «Черных пантер»; опечатка указывает на лицемерие предприятия. Ричард Никсон тоже следил за этим делом, назвав Бернштейна олицетворением «полного упадка американской интеллектуальной элиты «высшего класса».(Это было написано на полях меморандума Дэниела Мойнихана, призывающего к «мягкому пренебрежению» афроамериканскими проблемами.) Если, как сказал Уильям Ф. Бакли-младший, Бернштейн повторял жаргон фанатиков, то Вулф по-своему, рупор, его модная язвительная проза продвигает новое искусство клиновидной политики. Оглядываясь назад, можно сказать, что весь этот эпизод попахивает истерией, а Бернстайн ни в коем случае не был самым истеричным человеком в комнате.

«Мой отец был абсолютно бесстрашным», — сказал Александр Бернстайн на панели Карнеги.«Он никого и ничего не боялся». После своевременной паузы он добавил: «Кроме Джерома Роббинса». Конечно, Бернштейн не боялся Гувера, Никсона или Тома Вулфа. «Месса», дебютировавшая в сентябре 1971 года, была произведением нераскаянного радикализма, тотальной атакой на социальные, политические, религиозные и музыкальные условности. Поскольку это была первая пьеса, которую играли в Кеннеди-центре, ожидалось присутствие президента, но в одной из наиболее любопытных записок в файлах ФБР Гувер предупредил Никсона, что Бернстайн, возможно, замышляет «поставить в неловкое положение Соединенные Штаты». правительства штатов», побуждая президента и других официальных лиц аплодировать латинскому тексту на «антивоенную тему».(Кажется, он имел в виду Dona nobis stagem.) Различные члены водопроводчиков Белого дома, в том числе Дж. Гордон Лидди, изучили этот вопрос, и было решено, что Никсон не должен идти. Интересно, что Генри Киссинджер действительно присутствовал, и, согласно отчету общества в Times , ему «понравилось».

Что не нравится? Как оказалось, много. В предыдущих работах Бернштейн играл по правилам того жанра, в котором жил, как бы он их ни растягивал.«Вестсайдская история» — мюзикл с элементами модерна; «Эпоха беспокойства» и «Чичестерские псалмы» — классические произведения, переплетенные с джазом и блюзом. «Месса», созданная в сотрудничестве с композитором и автором текстов Стивеном Шварцем, безымянна. Он начинается с хаотичного звукового ландшафта голосов и перкуссии на квадрофонической ленте. Затем на электрогитаре звучат открытые квинты, и Celebrant, одетый в уличную одежду, скандирует: «Спой Богу простую песню» чистой, яркой лирической строкой. Начинается многосторонняя война стилей: бродвейские мелодии, госпел на манер шварцевского «Годспелла», попытки фолк-рока, гимновые хоры с марширующим оркестром, суровые реминисценции средневековой и ренессансной церковной музыки.Работа описывается как «Театральная пьеса для певцов, актеров и танцоров»; Основной сюжет заключается в том, что Целебрант пытается обновить свою церковь, берет на себя атрибуты лидера культа и в конечном итоге теряет контроль над своей общиной.

Тексты песен представляют собой величайшую проблему. Они изобилуют лукавой игрой слов («Пусть шпроты комаров жрут»), общежитской теологией («Верую я в Бога, / Но верит ли Бог в меня?») и сленговыми переписываниями Библии («Бог сказал: Да будет свет./ И был свет. /. . . И это было хорошо, брат / И это было чертовски хорошо»). Но прежде чем мы усмехнемся а-ля Вульф, Бернштейн говорит Богу: «Я врубаюсь! Но как?» — следует спросить, что на самом деле задумал композитор. Возможно, он держит в сатирическом зеркале никсоновскую Америку, дразня как истеблишмент, так и контркультуру. Возможно, он даже изображает собственную донкихотскую попытку овладеть поп-культурой. Целебрант, которого прихожане сначала боготворили, а затем подвергли критике, напоминает самого Бернштейна, предполагаемого спасителя классической музыки.И, если «Месса» иногда унизительно терпит неудачу в попытке слияния поп-классики, унижение является предметом финала, когда Celebrant разбивает свою чашу и замечает, «как легко все разбивается». Оркестр выбивает дрожащие, диссонирующие аккорды, похожие на резкий стук в дверь. (Аналогичная фигура появляется в плачах Симфонии «Иеремия».) Разрозненные фразы Целебранта также напоминают сцену безумия в «Питере Граймсе». Это как если бы Бернстайн устроил неконтролируемую вечеринку, а затем выпустил на волю демонов своей депрессии в предрассветные часы.Темная ночь души сменяется репризой «Простой песни», пылающим тональным каноном на «Лауда, Лауд» и мощным нежным благословением дома. Этот эпизод может быть величайшим театральным изобретением Бернстайна.

Тест Бернштейна

Что такое тест Бернштейна?

Тест Бернштейна (перфузионный тест на кислотность пищевода) является частью теста, называемого рН-тестированием пищевода. Он используется, чтобы определить, есть ли у вас гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь (ГЭРБ), или проверить, исходят ли ваши симптомы из пищевода.

Наиболее распространенным симптомом ГЭРБ является изжога. Изжога может ощущаться как жжение в груди. У вас может быть ГЭРБ, если у вас изжога более 2 раз в неделю. Ваш поставщик медицинских услуг может провести тест Бернштейна и другие тесты, чтобы быть уверенным. Однако тест Бернштейна проводится редко.

Зачем мне может понадобиться тест Бернштейна?

Некоторые симптомы ГЭРБ могут также быть признаками других заболеваний. Ваш поставщик медицинских услуг может использовать тест Бернштейна и другие тесты, чтобы выяснить, что вызывает ваши симптомы.Помимо изжоги, другие признаки ГЭРБ могут включать:

Важно знать, есть ли у вас ГЭРБ и как ее контролировать. Это может предотвратить ухудшение ваших симптомов. Это также может предотвратить больше проблем. Если ГЭРБ не лечить в течение длительного времени, это может привести к изменению слизистой оболочки пищевода (пищевода). Это известно как пищевод Барретта. Это может повысить риск заболеть раком пищевода. Это также может привести к воспалению пищевода, называемому эрозивным эзофагитом.

Каковы риски теста Бернштейна?

Существует риск рвоты или рвоты во время теста Бернштейна.У вас могут быть другие риски, в зависимости от вашего общего состояния здоровья. Обязательно поговорите со своим лечащим врачом о любых проблемах, которые у вас есть, до теста Бернштейна.

Как подготовиться к тесту Бернштейна?

Вы не должны ничего есть как минимум за 8 часов до исследования. Это часто означает отказ от еды и питья после полуночи.

Попросите своего поставщика медицинских услуг рассказать вам, что еще вы должны сделать перед тестом Бернштейна.

Что происходит во время теста Бернштейна?

Поговорите со своим лечащим врачом о том, что произойдет и как вы можете себя чувствовать во время теста Бернштейна.В общем можно ожидать следующее:

  • Врач введет тонкую гибкую трубку (назогастральный зонд) через нос в пищевод. Это может вызвать удушье и кашель.

  • Раствор соленой воды (смесь) и слабокислый раствор (например, желудочный сок) будут проходить через трубку в разное время.

  • Ваш врач спросит вас, когда вы почувствуете симптомы изжоги или боли.

  • Если у вас нет симптомов этих растворов, тест отрицательный и, вероятно, у вас нет ГЭРБ.

  • Если у вас есть симптомы только от раствора кислоты, тест положительный, и у вас может быть ГЭРБ.

После теста вы можете вернуться к своему обычному питанию. У вас может ненадолго заболеть горло. В большинстве случаев тест Бернштейна может определить, есть ли у вас заболевание.

Тест Бернштейна можно проводить вместе с другими тестами, такими как:

  • Пищеводная манометрия. Измеряет давление внутри пищевода.

  • 24-часовой анализ кислотности пищевода. Он измеряет количество кислоты, попадающей в пищевод из желудка в течение 24 часов.

  • Эндоскопическое исследование. Проверяет пищевод с помощью тонкой трубки с подсветкой.

Что происходит после теста Бернштейна?

Если у вас ГЭРБ, ваш лечащий врач может дать вам лекарство для снижения уровня кислоты в желудке. Он или она может также попросить вас прекратить есть за 3 часа до сна. Вас также могут попросить поднять изголовье кровати. Эти вещи помогут уменьшить симптомы ГЭРБ.

Если у вас очень тяжелый случай ГЭРБ, вам может потребоваться операция по подтяжке нижнего пищеводного сфинктера (НПС).Это предотвратит попадание содержимого желудка в пищевод.

Вот что вы можете сделать, чтобы контролировать ГЭРБ:

  • Бросьте курить.

  • Сбросьте вес, если вам нужно, и оставайтесь в здоровом весе.

  • Не пейте слишком много алкоголя и кофеина.

  • Не ешьте продукты, вызывающие изжогу.

  • Не носите тесную одежду вокруг живота.

Следующие шаги

Прежде чем согласиться на тест или процедуру, убедитесь, что вы знаете:

  • Название теста или процедуры

  • Причина, по которой вы проходите тест или процедуру

  • Каких результатов ожидать и что они означают

  • Риски и преимущества теста или процедуры

  • Каковы возможные побочные эффекты или осложнения

  • Когда и где вы должны пройти тест или процедуру

  • Кто будет проводить тест или процедуру и какова квалификация этого человека

  • Что произойдет, если вы не пройдете тест или процедуру

  • Любые альтернативные тесты или процедуры, о которых стоит подумать

  • Когда и как вы получите результаты

  • Кому звонить после теста или процедуры, если у вас есть вопросы или проблемы

  • Сколько вам придется заплатить за тест или процедуру

Онлайн-медицинский обозреватель: Джен Лерер, доктор медицины
Онлайн-медицинский обозреватель: Джон Ханрахан, доктор медицины
Онлайн-медицинский обозреватель: Раймонд Кент Терли BSN MSN RN

Дата последней проверки: 01.03.2020

© 2000-2022 Компания StayWell, ООО.Все права защищены. Эта информация не предназначена для замены профессиональной медицинской помощи. Всегда следуйте инструкциям своего лечащего врача.

%PDF-1.7 % 1015 0 объект > эндообъект внешняя ссылка 1015 180 0000000016 00000 н 0000004930 00000 н 0000005175 00000 н 0000005219 00000 н 0000005256 00000 н 0000005845 00000 н 0000005961 00000 н 0000006075 00000 н 0000006191 00000 н 0000006305 00000 н 0000006420 00000 н 0000006536 00000 н 0000006652 00000 н 0000006768 00000 н 0000006882 00000 н 0000006998 00000 н 0000007113 00000 н 0000007229 00000 н 0000007344 00000 н 0000007458 00000 н 0000007571 00000 н 0000007687 00000 н 0000007803 00000 н 0000007919 00000 н 0000008035 00000 н 0000008153 00000 н 0000008271 00000 н 0000008389 00000 н 0000008507 00000 н 0000008625 00000 н 0000008743 00000 н 0000008861 00000 н 0000008979 00000 н 0000009096 00000 н 0000009214 00000 н 0000009332 00000 н 0000009450 00000 н 0000009559 00000 н 0000009666 00000 н 0000009772 00000 н 0000009880 00000 н 0000009965 00000 н 0000010050 00000 н 0000010135 00000 н 0000010219 00000 н 0000010303 00000 н 0000010386 00000 н 0000010470 00000 н 0000010553 00000 н 0000010637 00000 н 0000010722 00000 н 0000010807 00000 н 0000010892 00000 н 0000010977 00000 н 0000011062 00000 н 0000011147 00000 н 0000011230 00000 н 0000011314 00000 н 0000011397 00000 н 0000011481 00000 н 0000011564 00000 н 0000011648 00000 н 0000011731 00000 н 0000011815 00000 н 0000011900 00000 н 0000011983 00000 н 0000012067 00000 н 0000012150 00000 н 0000012233 00000 н 0000012317 00000 н 0000012399 00000 н 0000012482 00000 н 0000012566 00000 н 0000012649 00000 н 0000012731 00000 н 0000012814 00000 н 0000012896 00000 н 0000012979 00000 н 0000013061 00000 н 0000013143 00000 н 0000013224 00000 н 0000013310 00000 н 0000013394 00000 н 0000013479 00000 н 0000013618 00000 н 0000013654 00000 н 0000013794 00000 н 0000013938 00000 н 0000014039 00000 н 0000014088 00000 н 0000014167 00000 н 0000018615 00000 н 0000022997 00000 н 0000027483 00000 н 0000027979 00000 н 0000028664 00000 н 0000029252 00000 н 0000030016 00000 н 0000030430 00000 н 0000030874 00000 н 0000031305 00000 н 0000031505 00000 н 0000031791 00000 н 0000031851 00000 н 0000032029 00000 н 0000032220 00000 н 0000032385 00000 н 0000032929 00000 н 0000033135 00000 н 0000033431 00000 н 0000033501 00000 н 0000033683 00000 н 0000038255 00000 н 0000038627 00000 н 0000038820 00000 н 0000039010 00000 н 0000039258 00000 н 0000039444 00000 н 0000039749 00000 н 0000044150 00000 н 0000044310 00000 н 0000044511 00000 н 0000048952 00000 н 0000053457 00000 н 0000057729 00000 н 0000064884 00000 н 0000069942 00000 н 0000070586 00000 н 0000071067 00000 н 0000074478 00000 н 0000075201 00000 н 0000075486 00000 н 0000075845 00000 н 0000076425 00000 н 0000077628 00000 н 0000080986 00000 н 0000082524 00000 н 0000083052 00000 н 0000083161 00000 н 0000100440 00000 н 0000100481 00000 н 0000101031 00000 н 0000101165 00000 н 0000158380 00000 н 0000158421 00000 н 0000158958 00000 н 0000159075 00000 н 00001 00000 н 00001 00000 н 00001

00000 н 00001

  • 00000 н 00001

    00000 н 0000191189 00000 н 0000191273 00000 н 0000191334 00000 н 0000191588 00000 н 0000191696 00000 н 0000191800 00000 н 0000191932 00000 н 0000192070 00000 н 0000192218 00000 н 0000192396 00000 н 0000192548 00000 н 0000192674 00000 н 0000192792 00000 н 0000192941 00000 н 0000193145 00000 н 0000193277 00000 н 0000193411 00000 н 0000193591 00000 н 0000193835 00000 н 0000193941 00000 н 0000194105 00000 н 0000194227 00000 н 0000194401 00000 н 0000194547 00000 н 0000194675 00000 н 0000194833 00000 н 0000194977 00000 н 0000003896 00000 н трейлер ]>> startxref 0 %%EOF 1194 0 объект >поток xڬT]lUl6՝&CM%-��DPö-M%QkRjbZv } mwW*]*R»hAbL{wڎ&7ss͹3

    .
  • Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.