Инструкция глицина: Препарат, улучшающий метаболизм головного мозга

Содержание

Препарат, улучшающий метаболизм головного мозга

Болюсы Хуато	Пилюли: банки 80 г в компл. с мерн. ложкой рег. №: П N011562/01 от 29.04.11
Гитагамп^®	Капс.: 50 шт. рег. №: Р N001526/01 от 09.02.09
Глицин	Таб. защечные и подъязычные 100 мг: 25, 50, 100 или 150 шт. рег. №: ЛП-005369 от 26.02.19
Глицин	Таб. подъязычные 100 мг: 10, 20 или 50 шт. рег. №: ЛП-004623 от 26.12.17
Глицин	Таб. подъязычные 100 мг: 50 или 100 шт. рег. №: ЛСР-001431/07 от 09.07.07 Дата перерегистрации: 20.12.18
Глицин	Таблетки подъязычные рег. №: ЛС-001851 от 27.12.11 Дата перерегистрации: 20.10.20
Глицин Реневал	Таб. защечные и подъязычные 100 мг: 20, 28, 30, 50, 56, 60, 100 или 105 шт. рег. №: ЛП-005638 от 08.07.19 Дата перерегистрации: 25.06.20
Глицин Форте	Таб. защечные 250 мг: 10, 20, 30, 50, 60, 90 или 100 шт. рег. №: ЛСР-002849/09 от 09.04.09
Глицин форте	Таб. защечные и подъязычные 250 мг: 10, 20, 30, 50, 60, 90, 100, 150, 270 или 300 шт. рег. №: ЛП-006837 от 11.03.21	Произведено: ОЗОН (Россия)

Глицин Форте	Таб. подъязычные 250 мг: 10, 20, 25, 30, 50, 75, 90, 100, 125, 225 или 250 шт. рег. №: ЛП-002286 от 28.10.13 Дата перерегистрации: 17.11.20 Таб. подъязычные 250 мг: 10, 20, 30, 50, 90 или 100 шт. рег. №: ЛП-002286 от 28.10.13 Дата перерегистрации: 17.11.20
Глицин-Канон	Таб. защечные 1000 мг: 5,10 или 20 шт. рег. №: ЛСР-008972/10 от 31.08.10
Глицин-МХФП	Таб. подъязычные 100 мг: 50 шт. рег. №: Р N003742/01 от 02.10.09 Дата перерегистрации: 11.10.11
Глутаминовая кислота	Таб., покрытые оболочкой, 250 мг: 60 шт. рег. №: ЛП-002250 от 26.09.13
Глютаминовая кислота	Таб., покр. кишечнораств. обол., 250 мг: 10, 20, 40 или 1000 шт. рег. №: Р N003127/01 от 24.11.08
Натрия оксибат	Р-р д/в/в и в/м введения 200 мг/1 мл: амп. 5 мл 5 или 10 шт. рег. №: ЛСР-003201/07 от 15.10.07 Дата перерегистрации: 02.02.18
Тиоцетам	Р-р д/в/в и в/м введения 25 мг+100 мг/мл: амп. 5 мл или 10 мл 10 шт. рег. №: ЛП-001618 от 02.04.12 Дата перерегистрации: 30.05.17
Тиоцетам	Таб., покр. пленочной оболочкой, 50 мг+200 мг: 30, 50, 60 или 100 шт. рег. №: ЛП-001761 от 02.07.12 Дата перерегистрации: 15.10.18	Произведено: ОЗОН (Россия)
Тиоцетам^®	Р-р д/в/в и в/м введения 25 мг+100 мг/мл: амп. 5 мл или 10 мл 10 шт. рег. №: ЛП-006915 от 09.04.21	Произведено: ОЗОН (Россия)
Цитофлавин^®	Р-р д/в/в введения: амп. 10 мл 5 или 10 шт. рег. №: Р N003135/01 от 21.11.08 Дата перерегистрации: 22.03.19
Цитофлавин^®	Таб., покр. кишечнорастворимой оболочкой: 50 или 100 шт. рег. №: ЛС-001767 от 13.09.11 Дата перерегистрации: 01.04.19
Глицин Озон	Таб. подъязычные 50 мг: 10 или 50 шт. рег. №: ЛС-001851 от 02.04.09
Глицин-Био	Таб. подъязычные 100 мг: 50 шт. рег. №: ЛС-001851 от 27.12.11 Дата перерегистрации: 14.01.13
Глицин-Био Фармаплант^®	Таб. подъязычные 100 мг: 50 шт. рег. №: ЛС-001851 от 27.12.11 Дата перерегистрации: 20.10.20
Церебронорм	Таб., покр. кишечнорастворимой обол.: 10, 20, 60, 100 или 200 шт. рег. №: ЛП-000275 от 17.02.11

Доппельгерц® актив Глицин+В-Витамины

Глицин (аминокислота) необходим для деятельности центральной нервной системы, улучшает метаболические процессы в тканях мозга, повышает умственную работоспособность. Глицин замедляет процесс дегенерации мышц, оказывает положительное влияние при мышечных дистрофиях. Оказывает мягкое успокаивающее действие, важен при стрессах и психоэмоциональном напряжении.

Витамин В1 положительно влияет на нервную систему и умственные способности. Поступает в организм с пищей, преимущественно растительного, а также животного происхождения, синтезируется микрофлорой толстой кишки. Дефицит поступления витамина В1 с пищей приводит к сдвигам в кислотно-основном состоянии. Нарушаются процессы метаболизма аминокислот, снижается биосинтез белков, что при дефиците тиамина в организме приводит к отрицательному азотистому балансу.

Витамин В6 играет большую роль в обмене веществ. Необходим для нормального функционирования центральной и периферической нервной систем. Активно участвует в обмене аминокислот, принимает участие в жировом и липидном обмене, улучшает усвоение ненасыщенных жирных кислот. Также витамин В6 влияет на кроветворение и иммунитет. Оказывает стимулирующее влияние на кислотообразующую функцию желудка и желчевыделительную функцию печени, нормализует функциональное состояние печени, активно восстанавливает нарушенные обменные процессы.

Витамин В12 обладает высокой биологической активностью, является фактором роста, необходим для нормального кроветворения и образования эритроцитов. Оказывает благоприятное воздействие на функцию печени и нервной системы. Активирует обмен углеводов и липидов, обладает липотропными свойствами, предупреждает жировую инфильтрацию печени, повышает активность окислительных ферментов, увеличивает потребление кислорода клетками при острой и хронической гипоксии. Витамин В12 усиливает иммунологическую реактивность организма. Важное значение имеет его способность регулировать функцию кроветворных органов.

Область применения: дополнительный источник витаминов В1, В6, В12, глицина.

Глицин форте с витаминами №30 (таб)

Глицин вырабатывается организмом человека, входит в двадцатку незаменимых аминокислот, необходимых для нормального развития и функционирования. Он используется для повышения мозговой активности. Недостаток глицина выражается в быстрой усталости организма. Человек становится нервным, не может сосредоточиться на выполняемой задаче. Глицин активизирует и нормализует процессы защитного торможения в центральной нервной системе, повышает умственную работоспособность, уменьшает психоэмоциональное напряжение.

Глицин положительно влияет на деятельность нервной системы. Он поможет:

• постепенно снять психоэмоциональное напряжение
• нормализовать сон
• повысить умственную работоспособность

Витамин С (аскорбиновая кислота) — оказывает благоприятное влияние на состояние центральной нервной системы. Необходим для защиты организма от вирусных и бактериальных инфекций. Улучшает эластичность кровеносных сосудов и проницаемость капилляров. Способствует лучшему усвоению железа и нормализации кроветворения.

Витамин В1 (тиамина гидрохлорид) — участвует в превращении пищи в энергию. Необходим для нормальной деятельности центральной нервной системы, передачи нервного импульса. Нормализует состояние сердечно-сосудистой и эндокринной систем.

Витамин В6 (пиридоксина гидрохлорид) — способствует улучшению памяти и настроения, так как участвует в синтезе серотонина, благотворно влияет на состояние нервной системы, печени, органов кроветворения, улучшает всасывание и усвоение магния.

Витамин В12 (цианокобалимин) — влияет на образование миелина — оболочки нервных волокон, способствуя улучшению состояния нервной системы, усиливает иммунитет, необходим для кроветворения.

Инулин – оказывает стимулирующее влияние на сократительную способность кишечной стенки, отличается высокой сорбционной способностью, ускоряя очищение организма от шлаков, улучшает усвоение кальция, железа и других минеральных веществ.

БАД. НЕ ЯВЛЯЕТСЯ ЛЕКАРСТВОМ. ПЕРЕД ПРИМЕНЕНИЕМ НЕОБХОДИМО ПРОКОНСУЛЬТИРОВАТЬСЯ СО СПЕЦИАЛИСТОМ.

Чем полезен глицин и как его принимать: малоизвестные факты о глицине

Так как аминоуксусная кислота является веществом, участвующим в синтезе белков, ее употребление извне также полезно и не приносит вред здоровью.

А теперь расскажем подробнее о пользе глицина.

№1 Помогает предотвратить старение

Глицин входит в состав глутатиона [Проверенный источник], мощного антиоксиданта, который защищает клетки от окислительных процессов, вызванных свободными радикалами, лежащими в основе многих заболеваний.

Без достаточного количества глицина в организме вырабатывается меньше глутатиона, что может негативно повлиять на то, как тело справляется с окислительными процессами в клетках и, таким образом старение будет наступать быстрее.

С возрастом уровень глутатиона снижается, поэтому употреблять аминоуксусная кислоту в таблетированном виде пожилым людям очень полезно.

№2 Укрепляет мышцы

Глицин также участвует в образовании креатина, вещества которое дает мышцам энергию. Поэтому многие спортсмены-бодибилдеры пьют специальные добавки на основе креатина, чтобы увеличить мышечную силу и массу.

В ходе последних исследований [Проверенный источник] было выявлено, что креатин также способен укреплять кости, улучшать функционирование мозга и облегчать протекание болезни Паркинсона и Альцгеймера.

Креатин в здоровом человеческом организме продуцируется в достаточном количестве, но если принимать глицин, то его выработка увеличивается и мышцы получают дополнительную энергию.

№3 Повышает эластичность кожи и укрепляет кости, связки и хрящи

Большое количество глицина также содержится в коллагене. Коллаген считается самым распространенным белком в теле человека. Это главный элемент, из которого состоят фасции, хрящи, связки, сухожилия и кости. Кроме того, коллаген отвечает за прочность и эластичность кожи. Когда его количество в организме уменьшается, то клетки, в которых он был, сжимаются, что влечет за собой появление морщин и дряблость костей, сухожилий, связок.

Биомеханические результаты исследований в животных моделях показали, что сухожилие более устойчиво к нагрузке на разрыв при богатой глицином диете. При этом глицин индуцировал синтез важных компонентов сухожилия. Имеющиеся данные позволяют предположить, что он может быть полезным дополнением для людей с воспалением сухожилий.

Поэтому если пить глицин в таблетированном виде, то процесс синтеза коллагена не будет останавливаться, а его количество уменьшаться.

№4 Глицин для сна

Последнее время все больше людей испытывают проблемы с ночным сном, а именно долго засыпают, просыпаются посреди ночи и чувствуют себя невыспавшимися на утро. Помочь избавиться от данных проблем может глицин.

Рассматриваемое вещество оказывает успокаивающее действие на нервную систему, вследствие чего человек начинает чувствовать внутренний баланс и перестает негативно реагировать на различные раздражающие факторы. Если выпить одну таблетку 100 мг глицина за 20 мин до сна, то процесс засыпания будет быстрым, а качество сна высоким.

В ходе эксперимента [Проверенный источник], проведенного с людьми, у которых была бессонница, было выявлено, что прием 3 г глицина перед сном уменьшает время, необходимое для засыпания. Кроме того, улучшается качество сна и не возникает дневная сонливость.

Таким образом, глицин является безопасной альтернативой снотворным средствам.

№5 Глицин от похмелья

Слишком большое количество алкоголя негативно сказывается на функционировании различных органов и системах человека, в особенности печени и ЦНС, а также приводит к появлению похмельного синдрома.

Вследствие научных исследований было выявлено, что глицин уменьшает вредное воздействие [Проверенный источник] спиртных напитков на печень, предотвращая тем самым ее интоксикацию и воспаление, оказывает профилактическое действие против гепатотоксичности и наряду с аланином проявляет особый характер для улучшения алкогольного обмена. Он снижает концентрацию алкоголя в крови за счет стимуляции метаболизма спирта в крови, а не в печени, что предотвращает развитие цирроза печени.

Более того, глицин применяют для лечения похмельного синдрома. Так, после того, как человек выпил алкогольный напиток, он попадает в кровь, транспортируется в печень и превращается там в ацетальдегид, ядовитое вещество, влияющее на общее состояние организма. При взаимодействие глицина с ацетальдегидом, последний превращается в ацетилглицин, который наоборот полезен для человека и участвует в синтезе гормонов, ферментов и белков.

Интересно, что глицин применяют в наркологии как средство для выведения из запоя и как профилактики от «белой горячки».

№6 Помогает предотвратить болезни сердечно-сосудистой системы

Прием глицина предотвращает закупоривание кровяных сосудов и сужение артерий, таким образом снижается риск возникновения атеросклероза. Кроме того, аминоуксусную кислоту применяют в комплексном лечении ишемического инсульта, так как она улучшает кровоснабжение головного мозга.

Механизм действия препарата Глицин также связан с высвобождением вырабатываемого в суставах активного вещества оксида азота [Проверенный источник], который отвечает за расслабление гладких мышц стенок сосудов, что приводит к увеличению кровотока и снижению кровяного давления. В результате, кровь циркулирует бесперебойно и доставляется ко всем органам, вследствие чего уменьшается риск возникновения сердечно-сосудистых заболеваний.

№7 Глицин для памяти, улучшения умственных способностей и психоэмоционального состояния

Глицин является тормозным нейромедиатором в центральной нервной системе и играет важную роль в обработке моторной и сенсорной информации. Кроме того, он улучшает мозговое кровообращение. Все это способствует повышению умственных способностей, а также может поднимать настроение.

Как сказано в инструкции препарата, он нормализует и активизирует процессы защитного торможения в ЦНС, в результате чего перевозбужденный человек успокаивается. Глицин можно принимать в стрессовых ситуациях.

Чтобы глицин оказывал все вышеперечисленные действия, его нужно пить согласно инструкции и указанным в ней правилах.

инструкция, применение, аналоги препарата, состав, показания, противопоказания, побочные действия в справочнике лекарств от УНИАН

Глицин является центральным нейромедиатором, который регулирует обмен веществ; нормализует и активирует процессы защитного торможения в центральной нервной системе. Улучшает метаболические процессы в тканях мозга, оказывает антидепрессивное и седативное действие.

Применение Глицина

Снижение умственной работоспособности.
При стрессовых ситуациях и психоэмоциональном напряжении (в период экзаменов, при конфликтных ситуациях).
Девиантные формы поведения детей и взрослых.
Функциональные и органические заболевания нервной системы (неврозы, неврозоподобные состояния, вегето-сосудистые дистонии, последствия нейроинфекции и черепно-мозговой травмы, перинатальные и другие формы энцефалопатии, в том числе алкогольного генеза), сопровождающихся повышенной возбудимостью, эмоциональной нестабильностью, снижением умственной работоспособности, нарушением сна.
Ишемический инсульт и нарушения мозгового кровообращения.
Как вспомогательное средство при лечении алкоголизма.

Глицин — состав и форма выпуска препарата

Состав:

Действующее вещество — Glycine; 1 таблетка сублингвальная содержит глицина 100 мг;

Вспомогательные вещества — повидон, воск монтановый гликолевый, аммонийно-метакрилатний сополимер (тип А), кальция стеарат.

Лекарственная форма — таблетки сублингвальные.

Глицин — как принимать препарат

Глицин применяется трансбукально или сублингвально (в таблетках в виде порошка после измельчения таблетки).

Детям старше 3 лет, подросткам, взрослым при снижении умственной работоспособности, памяти, внимания, при задержке умственного развития, при психоэмоциональном напряжении, при девиантных формах поведения Глицин назначают по 1 таблетке (100 мг) 2-3 раза в сутки в течение 14-30 дней.

Максимальная суточная доза 300 мг.

Детям в возрасте от 3 лет и взрослым при функциональных и органических заболеваниях нервной системы (неврозы, неврозоподобные состояния, вегето-сосудистые дистонии, последствия нейроинфекции и черепно-мозговой травмы, перинатальные и другие формы энцефалопатии назначают по 1 таблетке 2 — 3 раза в сутки, курс лечения – 7 – 14 дней. При необходимости курс лечения повторяют.

При лечении алкоголизма препарат назначают как вспомогательное средство по 1 таблетке 2 — 3 раза в сутки в течение 14 — 30 дней. При необходимости курс лечения повторяют 4 — 6 раз в год.

Глицин — противопоказания, побочные эффекты

Противопоказания — индивидуальная непереносимость препарата и повышенная чувствительность к отдельным его компонентам; артериальная гипотензия. Детский возраст до 3 лет.

Побочные реакции — в отдельных случаях при индивидуальной повышенной чувствительности возможно развитие аллергических реакций, а именно: ринит, конъюнктивит, крапивница, раздражение в горле, слабость.

Аналоги Глицина

Антифрон, Армадин, Боризол, Венокор, Глицин, Динар, Элфунат, Замексен, Интеллан, Келтикан, Ксаврон, Мексиприм, Цитофлавин

Источник: Государственный реестр лекарственных средств Украины. Инструкция публикуется с сокращениями исключительно для ознакомления. Перед применением проконсультируйтесь с врачом и внимательно ознакомьтесь с инструкцией. Самолечение может быть вредным для вашего здоровья.

срок годности и условия хранения

В каких условиях и сколько можно хранить Глицин? Есть ли разница между таблетками и ампулами? Как хранить мазь? Обо всём этом далее в статье.

Глицин – аминокислота, применяемая в медицине для стабилизации психо-эмоционального состояния больного, при нарушениях сна, постоянной тревоге или панических атаках. Классифицируется как БАД, не является сильнодействующим лекарственным средством, из-за чего не оказывает ярко выраженных побочных эффектов.

Срок годности Глицина

В форме таблеток и раствора для инъекций – 3 года, для мази – 2 года. Он указан в аннотационном листе (в самом конце).

Глицин форте Эвалар — модифицированный продукт с повышенной дозировкой (300 мг), обогащён витаминами группы В. Срок годности препарата определяется наименьшим сроком годности одного из составляющих. Так и в этом случае — срок составляет 3 года, однако витамины группы В теряют эффективность спустя 24 месяца.

Препарат можно хранить в холодильнике, но не замораживать. Срок годности при хранение в холодильнике не отличается от обычного.

Можно ли использовать препарат, если срок заканчивается за 5-10 дней?

Поскольку в основе препарата лежит биологически-активная аминокислота, не рекомендуется вводить его в виде инъекций. Что касается таблеток и мазей – использовать можно.

Срок годности до и после вскрытия препарата. Есть ли разница?

Для ампул: В медицинской практике не предусмотрено использование, уже ранее вскрытой, ампулы. Даже при условии герметичного закрытия ампулы, туда может попасть инородное вещество. Дозировка одной ампулы рассчитана на 1 использование, не меньше.

Для таблеток: Поскольку таблетка не содержит лактозной или целлюлозной оболочки, значит контакт с воздухом ей не страшен. Таблетки после вскрытия не теряют срока годности.

Для мази: При вскрытия срок годности сохраняется. Он будет стремительно сокращаться только в том случае, если оставить тюбик открытым.

Что происходит с лекарством со временем?

Аминокислоты проходят процесс денатурация (сворачивания). Таким образом теряется их эффективность. Мазь теряет жидкость, из-за чего хуже усваивается и наносится.

Как выявить просроченный препарат?

Глицин представляет собой таблетки белого цвета с мраморной поверхностью, с фаской. После окончания срока годности таблетка рассыпается, при контакте с фаской – сыпется порошок. Приобретает немного горький вкус. Мазь плохо впитывается и сворачивается в комочки. Раствор для инъекций внешне не изменяется.

Можно ли использовать просроченный препарат?

В случае употребления просроченного препарата может наблюдаться чрезмерное торможение нервной системы, тошнота или рвота, понижение давления, нервное состояние, потеря сна, перевозбуждение, тремор конечностей. Все эффекты не несут особого вреда здоровью, но доставляют дискомфорт.

ВНИМАНИЕ! Использование просроченного препарата влияет на скорость реакции и возможность управления транспортным средством.

Как хранить Глицин?

Препарат отлично сохраняется при комнатной температуре и влажности. Лучшее место для хранения – домашняя аптечка, герметичный пластиковый контейнер, без доступа света, подальше от детей. Диапазон температур – от 8 градусов Цельсия до 25. Крайне не рекомендуется замораживать лекарство или хранить в помещении с повышенной влажностью.

Препараты-аналоги

Антифронт. Устраняет мигрени, потерю сна и облегчает состояние метео-зависимых людей.
Армадин. Лекарство широкого спектра действия, устраняющее последствия психических и неврологических нарушений.
Глу(ю)тамин или глу(ю)таминовая кислота. Похожее, по воздействию вещество, выпускаемое в форме драже. Стимулирует метаболизм белка и общий обмен веществ.
Триптофан. Вещество, помогающее при депрессии и различных расстройствах.
Цебрилизин. Устраняет панические атаки, тревожное состояние.
Элфунат. Нормализует кровоснабжение мозга и периферических тканей.

Заключение

Безвредная пищевая добавка, неприхотливая к условиям хранения. Дозировка, объём упаковки и практика применения говорят о том, что упаковка заканчивается задолго до того, как истекает срок годности, так, что испытать побочные эффекты практически невозможно.

( 2 оценки, среднее 5 из 5 )

Глициния — уход и выращивание древовидной лианы

С наступлением весны в садах начинают распускаться белые и светло-сиреневые кисти прекрасных бутонов. Это радует глаз своим цветением глициния. Посадка и уход за плетущимся растением по плечу каждому дачнику. Его можно посадить у беседки, украсить лианой входные ворота и стены дома. Обильное и продолжительное цветение глицинии создает на приусадебном участке атмосферу сказочной страны.

Виды растения

Второе название растения — вистерия. Она относится к редкому роду листопадных лиан, входящих в семейство бобовых. Произрастает в природных условиях на Кавказе, в Восточной Азии, Крыму и Америке. Успешно протекает выращивание глицинии в открытом грунте на юге Украины и России, так как в этих регионах довольно теплые зимы и жаркое лето.

До недавнего времени жителям более сурового климата приходилось тщательно укрывать лиану с наступлением холодов, но, несмотря на такой уход, она часто замерзала и гибла. Сейчас эта проблема решена. Селекционеры вывели морозоустойчивый сорт глицинии, который получил поэтическое название «Голубая луна». Он выдерживает температуру воздуха до -40С, и теперь древовидную лиану можно без опаски сажать в средней полосе России, на Урале и в южной Сибири.

Глициния насчитывает 9 разновидностей. Самыми популярными у дачников, помимо морозоустойчивого сорта, считаются следующие.

Китайская глициния. Лиана вырастает до 20 метров, почти все лето цветет бледно-сиреневыми цветами, кисти которых достигают 30 см;
Японская глициния. Это невысокая лиана. Она растет в длину около 9 метров, но выгодно отличается от других сортов более крупными листьями и цветами;
Прекрасная глициния. Она плетется вверх до 10 метров. В июне зацветает белыми или голубоватыми цветками.

Остальные сорта вистерии менее распространены, и их редко используют для озеленения в нашей стране.

Посадка лианы

Перед посадкой нужно учитывать, что вистерия — многолетнее растение, поэтому место для нее следует тщательно выбирать. Выращивание глицинии будет успешнее, если ее укоренить на солнечном защищенном от ветра участке с питательной слабощелочной почвой. Растение высаживают в открытом грунте весной, когда заканчиваются последние морозы и земля хорошо прогреется. Если сделать это раньше, нежные саженцы могут не прижиться.

Участок земли, где планируется выращивание вистерии, нужно обязательно перекопать на штык лопаты, предварительно напитав почву минеральным удобрением. Рекомендованная доза — 20-30 г на кв. м площади.
Затем выкопать яму глубиной и шириной 50 см, насыпать внутрь толстый слой битого кирпича или керамзита и присыпать слегка землей.
После влить в углубление ведро воды. Подождать, пока оно впитается, и поставить туда саженец.
Присыпать его землей с огорода, аккуратно придавливая руками, и снова увлажнить землю.

Приготовьтесь к тому, что в первое время вистерия не будет активно расти. Не прекращайте регулярный уход, и постепенно она начнет выпускать тонкие побеги. Первое обильное цветение можно будет увидеть не раньше, чем через 4-5 лет.

Как правильно ухаживать

Грамотный уход заключается в подвязке юных побегов. Выращивание лианы должно происходить рядом с долговечной и мощной опорой, которая способна выдержать порывы ветра и вес взрослого растения.

Совет
Желательно подвязывать глицинию к опоре самостоятельно. Если она начнет плестись сама, то ее потом будет сложно распутать и уложить на землю перед заморозками.

Уход за глицинией невозможен без регулярного полива. Следите, чтобы земля была всегда влажная, но без застоя воды под кустом. С начала цветения и до осени полив надо слегка сократить. Переувлажненная почва может привести к тому, что у вистерии опадут распустившиеся кисти. На следующий день после увлажнения не забывайте осторожно взрыхлять землю под лианой, чтобы в лунке не образовывалась корка, мешающая растению нормально развиваться. В сильную жару побеги полезно опрыскивать водой из шланга. Такой уход смывает с листьев пыль и хорошо освежает.

Когда с глицинии опадут последние листья, нужно заняться подготовкой к зиме.

Так как большинство сортов вистерии не переносит сильных морозов, их нужно утеплять.
Для этого прикорневую часть высоко окучьте, отвяжите побеги от опоры и аккуратно разложите на земле.
Сверху присыпьте растение толстым слоем сухой травы и лапника.

Молодые побеги уязвимы к низким температурам, поэтому обязательно укрывайте глицинию в средней полосе России и в уральской области.

Обрезка

Чтобы уход был полноценным, растению необходима обрезка. Без нее вистерия не будет хорошо и долго цвести. Большинство цветков глицинии распускаются на прошлогодних и позапрошлогодних побегах, поэтому важно, чтобы цветовые почки на них сформировались правильно. Для этого все ветки лианы в мае укорачивают на 2 см.

Осенний уход также включает обрезку. В сентябре с молодых побегов нужно срезать верхушки, отсчитав 4 почки сверху. Соблюдая эти рекомендации, вы добьетесь максимальной пышности цветущего растения.

После цветения не забывайте удалять сухие бутоны, и регулярно избавляйтесь от больных старых ветвей.

Как лучше подкармливать

Выращивание глицинии невозможно без систематических подкормок. Во время активного роста и цветения их надо производить раз в неделю. Опытные садоводы рекомендуют чередовать минеральные и органические удобрения.

Хорошо зарекомендовал себя «Кемира люкс». Он на длительное время обеспечивает растение полезными элементами. Удобрение продается в жидком виде и в гранулах. Для подкормки глицинии его нужно разводить и использовать строго по инструкции.

Из органических подкормок для вистерии идеально подходит раствор коровяка.

Чтобы его приготовить, понадобится большая бочка. Поместите туда ведро коровьего навоза, который успел перепреть, и налейте 5 ведер воды.
Перемешайте и оставьте на 2 недели, чтобы удобрение настоялось.
Через полмесяца подкормка готова, и ее можно использовать.
Перед применением разбавьте органический раствор водой в соотношении 1:10 и влейте глицинии под корень.

В середине лета можно один раз подкормить растение мелом. Для этого измельчите 100 г мела в порошок, растворите в 10 л воды и увлажните почву под растущей лианой.

Совет
Если вы хотите увидеть буйное цветение, с осторожностью используйте азотсодержащие удобрения. Их излишек в почве приведет к тому, что глициния будет наращивать зеленую массу и быстро расти вверх, но совсем престанет цвести.

Размножение семенами

Выращивание лианы из семян редко практикуют, так как способ достаточно сложный и не всегда успешный.

Вам понадобится приготовить почвенную смесь для посадки. Возьмите по одной части песка и дерновой земли, добавьте к ним четыре части листовой земли и хорошенько перемешайте.
Поместите грунт в специальный ящик с дырочками на дне, посейте семена и сбрызните землю водой из пульверизатора.
Сверху накройте ящик полиэтиленом или стеклом. Поставьте своеобразный парник в теплое темное место на 4 недели.

В этот период не забывайте поднимать стекло для проветривания и полива. За это время в ящике проклюнутся первые ростки. Через месяц их можно поставить на освещенный подоконник и обеспечить обычный уход. Когда у растений сформируются 2 листика, их нужно пересадить в большие емкости вместе с комом земли на корнях. В течение зимы продолжайте выращивание саженцев на подоконнике. Весной их укореняют на улице. Они хорошо приживаются в открытом грунте, но часто долго не цветут.

Размножение отводками

Проще всего получить новое растение отводками. В мае подберите здоровый молодой побег длиной около 15 см. Посредине сделайте косой надрез острым ножом. Рядом с лианой поставьте широкую емкость с плодородной почвой. Наклоните подготовленную ветвь и прикопайте в горшке. Верхушка побега должна обязательно оставаться на свободе. Если отводку обеспечить полноценный уход, включающий в себя калийно-фосфорные подкормки и полив, постепенно он пустит корни и пойдет в рост.

К осени отводок хорошо вырастает, и у него появляется несколько веток. Лишние побеги нужно безжалостно оборвать, осторожно отделить отводок от взрослой глицинии и занести растение в горшке на зиму в погреб. Весной его пересаживают на новое место.

Помимо этих двух способов, некоторые умельцы умудряются размножать вистерию прививкой на корнях или черенками. Методы неэффективны и редко дают положительный результат.

В Сибири глицинию часто выращивают летом в больших горшках, которые ставят на приусадебном участке. Когда наступает поздняя осень, растение заносят в погреб, где оно стоит до весны. На следующий год лиану пересаживают в более широкий горшок и вновь выносят на улицу.

Глициния великолепно смотрится в ландшафтном дизайне. Она отлично маскирует неприглядные стены, украшает заборы или беседки. Обязательно посадите это неприхотливое растение, и через несколько лет ваше жилище полностью преобразится.

Польза для здоровья, побочные эффекты, применение, дозы и меры предосторожности

де Конинг Т.Дж., Дюран М., Дорланд Л. и др. Благоприятные эффекты L-серина и глицина при лечении судорог при дефиците 3-фосфоглицератдегидрогеназы. Ann Neurol 1998; 44: 261-5 .. Просмотреть аннотацию.

Evins AE, Фитцджеральд С.М., Wine L и др. Плацебо-контролируемое испытание глицина, добавленного к клозапину при шизофрении. Am J Psychiatry 2000; 157: 826-8 .. Просмотреть аннотацию.

File SE, Fluck E, Fernandes C.Благотворное влияние глицина (биоглицина) на память и внимание у людей молодого и среднего возраста. J Clin Psychopharmacol 1999; 19: 506-12. . Просмотр аннотации.

Fries MH, Rinaldo P, Schmidt-Sommerfeld E, et al. Изовалериановая ацидемия: ответ на лейциновую нагрузку после трех недель приема добавок глицина, L-карнитина и комбинированной терапии глицин-карнитином. J Pediatr 1996; 129: 449-52 .. Просмотреть аннотацию.

Гусев Е.И., Скворцова В.И., Дамбинова С.А. и др. Нейропротекторные эффекты глицина в терапии острого ишемического инсульта.Цереброваск Дис 2000; 10: 49-60. Просмотр аннотации.

Харви С.Г., Гибсон-младший, Берк, Калифорния. L-цистеин, глицин и dl-треонин в лечении гипостатических язв на ногах: плацебо-контролируемое исследование. Pharmatherapeutica 1985; 4: 227-30 .. Просмотреть аннотацию.

Heresco-Levy U, Javitt DC, Ermilov M, et al. Двойное слепое плацебо-контролируемое перекрестное испытание адъювантной терапии глицином для лечения резистентной шизофрении. Br J Psychiatry 1996; 169: 610-7 .. Просмотреть аннотацию.

Heresco-Levy U, Javitt DC, Ermilov M, et al.Эффективность высоких доз глицина при лечении стойких негативных симптомов шизофрении. Arch Gen Psychiatry 1999; 56: 29-36 .. Просмотреть аннотацию.

Джавитт, округ Колумбия, Балла А., Сершен Х, Лайта А.Э. Премия за исследования Беннета. Аннулирование фенциклидин-индуцированных эффектов глицином и ингибиторами транспорта глицина. Biol Psychiatry 1999; 45: 668-79 .. Просмотреть аннотацию.

Джавитт Д.К., Зильберман И., Зукин С.Р. и др. Облегчение негативных симптомов при шизофрении глицином. Am J Psychiatry 1994; 151: 1234-6.. Просмотр аннотации.

Поткин С.Г., Джин Й., Банни Б.Г., Коста Дж., Гуласекарам Б. Эффект клозапина и дополнительных высоких доз глицина при резистентной к лечению шизофрении. Am J Psychiatry 1999; 156: 145-7 .. Просмотреть аннотацию.

Rose ML, Cattley RC, Dunn C, et al. Пищевой глицин предотвращает развитие опухолей печени, вызванных пролифератором пероксисом WY-14,643. Канцерогенез 1999; 20: 2075-81 .. Просмотреть аннотацию.

Rose ML, Madren J, Bunzendahl H, Thurman RG. Пищевой глицин подавляет рост опухолей меланомы B16 у мышей.Канцерогенез 1999; 20: 793-8 .. Просмотреть аннотацию.

Турман Р.Г., Чжун З., фон Франкенберг М. и др. Профилактика вызванной циклоспорином нефротоксичности с помощью диетического глицина. Трансплантация 1997; 63: 1661-7 .. Просмотреть аннотацию.

Инь М., Икедзима К., Arteel GE, Seabra V и др. Глицин ускоряет восстановление после повреждения печени, вызванного алкоголем. J Pharmacol Exp Ther 1998; 286: 1014-9 .. Просмотреть аннотацию.

Чжун З., Arteel GE, Коннор HD и др. Циклоспорин А увеличивает гипоксию и выработку свободных радикалов в почках крыс: профилактика с помощью диетического глицина.Am J Physiol 1998; 275: F595-604 .. Просмотреть аннотацию.

Новинка — глицин ELISA — Rocky Mountain Diagnostics

О глицине

Глицин — это аминокислота, которая считается наиболее важным тормозным нейромедиатором в центральной нервной системе, особенно в спинном мозге, стволе мозга и сетчатке, и играет ключевую роль в регуляции метаболизма, антиоксидантных реакциях и неврологической функции.

Обнаружение глицина показано при большом количестве заболеваний, от инфаркта, опухоли, лейкоэнцефалопатий, инфекции до глиоза. Кроме того, исследования показывают, что глицин может помочь улучшить восстановление памяти у людей с широким спектром недосыпающих состояний, включая смену часовых поясов и переутомление.

В качестве питательного вещества глицин используется для: (1) предотвращения повреждения тканей; (2) повысить антиоксидантную способность; (3) способствовать синтезу белка и заживлению ран; (4) повысить иммунитет; и (5) лечить метаболические нарушения при ожирении, диабете, сердечно-сосудистых заболеваниях, ишемических реперфузионных повреждениях, раковых заболеваниях и различных воспалительных заболеваниях.

ELISA глицина — это чувствительный анализ для количественного определения глицина в образцах мочи человека, предназначенный только для исследовательских целей.

Характеристики анализа

Общая пробоподготовка. Дериватизация в жидкой фазе (96-луночный реакционный планшет). Иммуноанализ с использованием микротитровального планшета размером 12×8 лунок (с предварительно нанесенным покрытием). 6 стандартов. 2 элемента управления; готов к использованию.

Размер образца: 20 мкл мочи

Стандартный диапазон: 0/2.5-2500 мкг / мл

Чувствительность: 3,3 мкг / мл

Время анализа: Подготовка образцов и дериватизация 2,5 часа; ELISA в течение ночи, 2 x 30 мин 2 x 30 мин

Вещество	Перекрестная реактивность (%)
Глицин	100
D-Serin	3.7
L-цистин	1,8
Бета-Аланин	0,7
GABA	0,8
L-аспарагиновая кислота	<0,1
L-глутамат	<0.1
Таурин	<0,1

Для получения дополнительной информации:

Продукт Glycine Elisa

Федеральный регистр

:: Глицин из Индии и Китайской Народной Республики: приказы о компенсационных пошлинах

Начать преамбулу

Правоприменение и соответствие, Управление международной торговли, Министерство торговли.

На основании положительных окончательных определений Министерства торговли (торговли) и Комиссии по международной торговле (ITC), Commerce издает приказы о компенсационных пошлинах на глицин из Индии и Китайской Народной Республики (Китай).

Действительно до 21 июня 2019 г.

Начать дополнительную информацию

Давина Фридманн по телефону (202) 482-0698 или Джули Гейгер по телефону (202) 482-2057 (Индия) или Тайлер Вайнхольд по телефону (202) 482-1121 (Китай), Отдел AD / CVD, Офис VI, Правоприменение и соответствие, Управление международной торговли, U.S. Министерство торговли, 1401 Конституция авеню NW, Вашингтон, округ Колумбия 20230.

Конец Дополнительная информация Конец преамбулы Начать дополнительную информацию

Фон

В соответствии с разделами 705 (d) и 777 (i) (1) Закона о тарифах 1930 г. с поправками (Закон) и 19 CFR 351.210 (c), Commerce опубликовала свои окончательные положительные заключения в ходе расследования компенсационных пошлин. глицина из Индии и Китая на 1 мая 2019 г. ^[] 14 июня 2019 года ИТЦ уведомил торговую организацию о своих окончательных положительных решениях о том, что отрасль в Соединенных Штатах Америки понесла материальный ущерб по смыслу статьи 705 (b) (1) (A) (i) Закона по причине: субсидированный импорт глицина из Индии и Китая.^[]

Объем заказов

Товар, на который распространяется этот заказ, — это глицин из Индии и Китая. Полное описание объема заказов, , см. В приложении к настоящему уведомлению.

Приказы о компенсационных пошлинах

14 июня 2019 г., в соответствии с разделами 705 (b) (1) (A) (i) и 705 (d) Закона, ИТЦ уведомил Торговлю о своих окончательных определениях, что отрасль в Соединенных Штатах пострадал из-за импорта глицина из Индии и Китая.^[] Таким образом, в соответствии с разделами 705 (c) (2) и 706 Закона мы издаем эти приказы о компенсационных пошлинах. Поскольку ИТЦ определил, что импорт глицина из Индии и Китая наносит материальный ущерб промышленности США, не ликвидированные поступления таких товаров из Индии и Китая, ввезенные или снятые со склада для потребления, подлежат оценке компенсационных пошлин.

В результате окончательных положительных решений ITC в соответствии с разделом 706 (a) (1) Закона коммерция направит U.S. Служба таможенного и пограничного контроля (CBP) для оценки, после получения дальнейших указаний от коммерции, компенсационных пошлин на неликвидные поступления глицина из Индии и Китая. Компенсационные пошлины будут взиматься в отношении неликвидных поступлений глицина из Индии и Китая, поступивших или снятых со склада для потребления 4 сентября 2018 г. или после этой даты, даты публикации Предварительных определений , ^[] но не будет включать записи, сделанные после истечения срока действия временных мер и до публикации в Федеральном реестре решения ITC о травмах, как описано ниже.

Приостановление ликвидации

В соответствии с разделом 706 Закона, коммерция даст указание CBP возобновить приостановление ликвидации рассматриваемых товаров (, т.е. глицин из Индии и Китая), вступившее в силу с даты публикации окончательного определения ITC Start Printed в Федеральный регистр , и оценить, по дальнейшим инструкциям коммерции в соответствии с 706 (a) (1) Закона, компенсационные пошлины для каждой записи рассматриваемого товара в сумме, основанной на чистых ставках компенсационных субсидий для объекта товар.Мы намерены поручить CBP требовать, в то время как импортеры обычно вносят расчетные пошлины на этот товар, денежные депозиты для каждой позиции рассматриваемых товаров, равные ставкам, указанным ниже. Эти инструкции о приостановлении ликвидации остаются в силе до дальнейшего уведомления. Все остальные ставки применяются ко всем производителям или экспортерам, не указанным конкретно.

Ориентировочные ставки субсидий

Предполагаемые ставки субсидии для каждого ордера на компенсационную пошлину составляют:

Экспортер / производитель	Ставка субсидии (в процентах)
Индия
Kumar Industries, Индия	6.99
Paras Intermediates Private Limited	3,03
Все остальные	5,01
Китай
JC Chemicals Limited	144,01
Sigmachem Corp	144,01	Sigmachem Corp	144,01	Все прочие	144,01

Временные меры

Раздел 703 (d) Закона гласит, что приостановление ликвидации на основании положительного предварительного решения не может оставаться в силе более четырех месяцев.Commerce опубликовала свое утвердительное предварительное определение 4 сентября 2018 года. Таким образом, четырехмесячный период, начинающийся с даты публикации предварительного определения , закончился 1 января 2019 года. В соответствии с разделом 707 (b) Закона Закон, сбор денежных депозитов по ставкам, перечисленным выше, начнется с даты публикации окончательного решения ITC о травмах в Федеральном реестре .

Таким образом, в соответствии с разделом 703 (d) Закона, коммерция проинструктировала CBP прекратить приостановление ликвидации и ликвидировать, без учета компенсационных пошлин, неликвидные поступления глицина из Индии и Китая, введенные или снятые со склада для потребление после 1 января 2019 года, даты истечения срока действия временных мер, до дня, предшествующего дате публикации окончательных утверждений ИТЦ о травмах в Федеральном реестре .Приостановление ликвидации возобновится с даты публикации окончательных утверждений ИТЦ о травмах в Федеральном реестре .

Уведомления для заинтересованных сторон

Это уведомление представляет собой приказы о компенсационных пошлинах в отношении глицина из Индии и Китая в соответствии с разделом 706 (а) Закона. Заинтересованные стороны могут найти список действующих приказов о компенсационных пошлинах по адресу http://enforcement.trade.gov/stats / iastats1.html.

Эти приказы публикуются в соответствии с разделами 705 (c) и 706 (a) Закона и 19 CFR 351.211 (b).

Начать подпись

Датировано: 18 июня 2019 г.

Джеффри И. Кесслер,

Помощник секретаря по обеспечению соблюдения и соблюдению требований.

Конец подписи

Приложение

Объем заказов

Товар, на который распространяется этот заказ, представляет собой глицин любого уровня чистоты или сорта.Это включает глицин всех уровней чистоты, который охватывает все формы сырого или технического глицина, включая, помимо прочего, глицинат натрия, суспензию глицина и любые другие формы аминоуксусной кислоты или глицина. Предметные товары также включают глицин и прекурсоры высушенного кристаллического глицина, которые обрабатываются в третьей стране, включая, помимо прочего, рафинирование или любую другую обработку, которая в противном случае не исключила бы товар из объема этих заказов, если бы они выполнялись в стране производство включенного в объем поставки глицина или предшественников высушенного кристаллического глицина.Глицин имеет регистрационный номер службы химических рефератов (CAS) 56-40-6. Глицин и глициновая суспензия включены в Гармонизированный тарифный план США (HTSUS) в субпозицию 2922.49.43.00. Глицинат натрия классифицируется в HTSUS под 2922.49.80.00. Хотя подзаголовки HTSUS и регистрационный номер CAS приведены для удобства и для таможенных целей, письменное описание объема этих заказов является показательным.

Конец дополнительной информации

[FR Док.2019-13361 Подана 6-20-19; 8:45]

КОД СЧЕТА 3510-DS-P

Протокол вестерн-блоттинга

| Abcam

Наш протокол вестерн-блоттинга включает растворы и реагенты, процедуры и полезные ссылки, которые помогут вам в ходе эксперимента.

Пересмотрена 14 декабря 2020 г.

Вестерн-блоттинг — это метод, в котором используются специфические антитела для идентификации белков, которые были разделены по размеру с помощью гель-электрофореза.В иммуноанализе используется мембрана из нитроцеллюлозы или ПВДФ (поливинилиденфторид). Гель помещают рядом с мембраной, и приложение электрического тока заставляет белки мигрировать из геля на мембрану. Затем мембрану можно дополнительно обработать антителами, специфичными для интересующей мишени, и визуализировать с помощью вторичных антител и реагентов для обнаружения.

Содержание

Посмотрите видео с нашим протоколом вестерн-блоттинга ниже.

Растворы и реагенты: буферы для лизиса

Эти буферы можно хранить при 4 ° C в течение нескольких недель или аликвотировать и хранить при -20 ° C до года.

Буфер NP-40

150 мМ NaCl
1,0% NP-40 (можно заменить 0,1% Triton X-100)
50 мМ Tris-HCl, pH 8,0
Ингибиторы протеаз

RIPA-буфер (буфер для анализа радиоиммунопреципитации)

150 мМ NaCl
1% IGEPAL CA-630
0,5% дезоксихолат натрия
0,1% SDS (додецилсульфат натрия)
Cl 50 мМ Tris-9034
Ингибиторы протеаз

Трис-HCl

20 мМ Трис-HCl
Ингибиторы протеаз

Laemmli 2X буфер / загрузочный буфер

4% SDS
10% 2-меркаптоэтанол
20% глицерин
0.004% бромфенолового синего
0,125 M Трис-HCl

Проверить pH и довести до 6,8

Рабочий буфер (трис-глицин / SDS)

25 мМ Трис-основание
190 мМ

Проверьте pH и доведите до 8,3

Буфер для переноса (влажный)

25 мМ Трис-основание
190 мМ глицин
20% метанол
Проверьте pH и отрегулируйте до 8,3

Для белков крупнее 80 кДа мы рекомендуем включать SDS в конечной концентрации 0.1%.

Буфер для переноса (полусухой)

48 мМ Трис
39 мМ глицин
20% метанол
0,04% SDS

Блокирующий буфер

3–5% молока крупного рогатого скота сывороточный альбумин)

Добавить в буфер TBST. Хорошо перемешайте и профильтруйте. Отсутствие фильтрации может привести к появлению пятен, когда крошечные темные зерна будут загрязнять пятно во время проявления цвета.

Лизис образца

Приготовление лизата из клеточной культуры

Поместите чашку для культивирования клеток на лед и промойте клетки ледяным PBS.
Аспирируйте PBS, затем добавьте ледяной буфер для лизиса (1 мл на 10 ⁷ клеток на 100 мм чашку / 150 см ^{2 колба}; 0,5 мл на 5×10 ⁶ клеток на 60 мм чашку / 75 см ^{2 колбы}).
Соскребите прилипшие клетки с чашки с помощью холодного пластикового скребка для клеток, затем осторожно перенесите суспензию клеток в предварительно охлажденную микроцентрифужную пробирку. В качестве альтернативы клетки можно трипсинизировать и промывать PBS перед ресуспендированием в буфере для лизиса в микроцентрифужной пробирке.
Поддерживайте постоянное перемешивание в течение 30 минут при 4 ° C.
Центрифуга в микроцентрифуге при 4 ° C. Возможно, вам придется изменить силу и время центрифугирования в зависимости от типа клеток; Рекомендуемое значение — 20 минут при 12000 об / мин, но это должно быть определено для вашего эксперимента (лейкоциты нуждаются в очень легком центрифугировании).
Осторожно извлеките пробирки из центрифуги и поместите на лед, аспирируйте супернатант и поместите в свежую пробирку, хранящуюся на льду, и выбросьте осадок.

Приготовление лизата из тканей

Рассеките интересующую ткань чистыми инструментами, предпочтительно на льду, и как можно быстрее, чтобы предотвратить разложение протеазами.
Поместите ткань в круглодонные микроцентрифужные пробирки или пробирки Эппендорфа и погрузите в жидкий азот для быстрого замораживания. Храните образцы при -80 ° C для дальнейшего использования или на льду для немедленной гомогенизации. Для образца ткани размером ~ 5 мг быстро добавьте в пробирку ~ 300 мкл ледяного буфера для лизиса, гомогенизируйте с помощью электрического гомогенизатора, дважды промойте лезвие еще 2 х 200 мкл буфера для лизиса, затем поддерживайте постоянное перемешивание в течение 2 часов. при 4 ° C (например, поместить на орбитальный шейкер в холодильник). Объемы буфера для лизиса должны определяться в зависимости от количества присутствующей ткани; Белковый экстракт не должен быть слишком разбавленным, чтобы избежать потери белка и больших объемов образцов для загрузки в гели.Минимальная концентрация — 0,1 мг / мл, оптимальная — 1–5 мг / мл.
Центрифуга в течение 20 минут при 12000 об / мин при 4 ° C в микроцентрифуге. Осторожно извлеките пробирки из центрифуги и поместите на лед, аспирируйте супернатант и поместите в свежую пробирку, хранящуюся на льду; выбросить гранулы.

Подготовка образца

Удалите небольшой объем лизата для проведения количественного анализа белка. Определите концентрацию белка для каждого клеточного лизата.
Определите количество белка для загрузки и добавьте равный объем 2X буфера для образцов Лэммли.
Мы рекомендуем уменьшать и денатурировать образцы, используя следующий метод, если только в интерактивном техническом описании антител не указано, что следует использовать невосстанавливающие и неденатурирующие условия. .
Чтобы уменьшить и денатурировать образцы, кипятите лизат каждой клетки в буфере для образцов при 100 ° C в течение 5 мин. Лизаты можно разделить на аликвоты и хранить при -20 ° C для дальнейшего использования.

Загрузка и запуск геля

Загрузите равные количества белка в лунки геля SDS-PAGE вместе с маркером молекулярной массы.Загрузите 20–30 мкг общего белка из клеточного лизата или гомогената ткани или 10–100 нг очищенного белка.
Запустите гель в течение 1-2 часов при 100 В.

T Время и напряжение могут потребовать оптимизации. Мы рекомендуем следовать инструкциям производителя. Следует использовать восстанавливающий гель, если в таблице данных антител не рекомендованы невосстанавливающие условия.

Требуемый процент геля зависит от размера интересующего вас белка:

Размер белка	Процент геля
4–40 кДа	20%
12–45 кДа	15%
10–70 кДа	12.5%
15–100 кДа	10%
25–100 кДа	8%

Также можно использовать градиентные гели.

Перенос белка из геля на мембрану

Мембрана может быть нитроцеллюлозной или ПВДФ. Активируйте ПВДФ метанолом в течение 1 мин и промойте буфером для переноса перед подготовкой стопки. Время и напряжение передачи могут потребовать некоторой оптимизации.Мы рекомендуем следовать инструкциям производителя. Перенос белков на мембрану можно проверить с помощью окрашивания по Понсо S перед этапом блокирования.

Подготовьте стопку следующим образом:

Рисунок 1. Пример подготовленной стопки.

Все дорожки: антитело к бета-актину — контроль нагрузки (ab8227) при разведении 1/5000

Дорожка 1: экстракт цельных клеток HeLa
Дорожка 2: экстракт дрожжевых клеток
Дорожка 3: лизат ткани мозга мыши

Протоколы предоставляются Abcam «КАК ЕСТЬ» на основе экспериментов в лабораториях Abcam с использованием реагентов и продуктов Abcam; ваши результаты от использования протоколов вне этих условий могут отличаться.

Стенограмма вебинара

Целью вестерн-блоттинга является разделение белков в геле по молекулярной массе. Затем белки переносятся на мембрану, где их можно обнаружить с помощью антител. Нагрейте образцы до 95 ° C в течение 5–10 минут в буфере для образцов, содержащем восстановитель, такой как бета-меркаптоэтанол. Это приводит к получению линеаризованных белков с отрицательным зарядом, пропорциональным их размеру.

Поместите гель в емкость для электрофореза и добавьте буфер, убедившись, что верхняя часть лунок закрыта. Процентное содержание акриламида в используемом геле зависит от молекулярной массы целевого белка. Загрузите рынок молекулярной массы в первую дорожку, затем загрузите образцы в соседние лунки. Все образцы содержат равное количество белка. После загрузки всех образцов добавьте рабочий буфер, закройте емкость для электрофореза крышкой. Включите источник питания и установите напряжение, рекомендованное производителем гелей в резервуаре с гелем.Вы должны увидеть пузырьки, поднимающиеся через резервуар. Пропустите гель до тех пор, пока фронт красителя не переместится достаточно вниз по гелю.

Следующий этап — перенос белков из геля на мембрану. Мембраны обычно изготавливают из нитроцеллюлозы или ПВДФ. Выньте гель из резервуара и осторожно извлеките его из пластикового футляра. Отрежьте лунки и ножку для геля и поместите гель в буфер для переноса. Подготовьте стопку для переноса, поместив мембрану и гель между фильтровальной бумагой и губками.Мембрана должна быть ближе всего к положительному электроду, а гель — к отрицательному. С помощью небольшого валика удалите пузырьки между гелем и мембраной. Зажмите раздаточную коробку закрытой и погрузите ее в передаточный бак, содержащий передаточный буфер. Добавьте воды во внешнюю камеру, чтобы система остыла, и наденьте крышку. Включите источник питания, чтобы начать перенос белка. Время и напряжение требуют оптимизации, поэтому ознакомьтесь с инструкциями производителя.

Теперь, когда белки переместились из геля на нитроцеллюлозную мембрану, интересующий белок может быть обнаружен с помощью антитела.Мембрану можно удалить из кассеты, и теперь должен быть виден маркер молекулярной массы. При необходимости перенос белков может быть подтвержден окрашиванием мембраны раствором Ponceau S. Чтобы предотвратить неспецифическое связывание антитела, необходимо заблокировать мембрану. Вылейте блокирующий буфер на мембрану и осторожно перемешайте качалкой. Обычно это делается с использованием раствора пятипроцентного молочного или бычьего сывороточного альбумина, BSA, в течение двух часов при комнатной температуре или в течение ночи при четырех градусах.Время и тип блокирующего буфера должны быть оптимизированы, поэтому подробные сведения см. В таблице основных антител, которые вы собираетесь использовать.

После того, как мембрана заблокирована, удалите блокирующий буфер и добавьте разбавленное первичное антитело в тот же раствор. Инкубируйте на качалке, как раньше. Обычно инкубация первичных антител проводится в течение одного часа при комнатной температуре или в течение ночи при четырех градусах С. Необходимо оптимизировать концентрацию антител и время инкубации. Обратитесь к таблице данных антител для руководства.Слейте первичное антитело и дважды промойте мембрану в промывочном буфере. Затем выполните одну 15-минутную стирку и три 10-минутных стирки на качалке. Промывочный буфер обычно представляет собой трис-забуференный физиологический раствор, TBS или забуференный фосфатом физиологический раствор, PBS, с 0,1% твина 20.

Слейте промывочный буфер и инкубируйте мембрану в конъюгированном вторичном антителе, которое было разбавлено блокирующим буфером. Обычно это делается в течение одного часа при комнатной температуре, но необходимо оптимизировать концентрацию антител и время инкубации.Слейте вторичное антитело и промойте мембрану, как показано ранее.

Существует несколько различных систем обнаружения. Если вторичные антитела конъюгированы с ферментом, инкубируйте мембрану в соответствующем субстрате перед визуализацией. Если вторичные антитела представляют собой флуоресцентные конъюгаты, вы можете перейти непосредственно к этапу визуализации. Визуализацию можно проводить с помощью рентгеновской пленки или цифровой системы визуализации. Поместите мембрану в лоток для визуализации. Поместите лоток переноса изображений в систему обработки изображений.Скорее всего, потребуется оптимизировать время экспозиции, чтобы четко определять полосы, относящиеся к интересующим белкам.

AD / CV Новости: концевые блоки, глицин, ручные тележки, газонокосилки, макаронные изделия

Управление по международной торговле и / или Комиссия по международной торговле недавно объявили о следующих действиях по делам об антидемпинговых и / или компенсационных пошлинах. Для получения дополнительной информации о обязанностях AD / CV, в том числе о том, как уменьшить ответственность, свяжитесь с Кристен Смит по телефону (202) 730-4965.

Концевые блоки — выдача (1) пошлин AD на концевые блоки из кованой стали из Германии и Италии с пересмотренными демпинговыми маржами 4,79 и 78,36 процентов для Германии и от нуля до 58,48 процентов для Италии и (2) пошлинами CV заказы на такие товары из Китая, Германии, Индии и Италии с пересмотренными ставками чистых субсидий от 16,8 до 336,55 процента для Китая, от 5,86 до 14,81 процента для Германии, 5,2 процента для Индии и от 3,12 до 44,86 процента для Италии

Глицин — отмена административного рассмотрения приказа AD по глицину из Таиланда на период августа.С 5 сентября 2019 г. по 30 сентября 2020 г. и указание CBP оценить пошлины AD на ввоз таких товаров по применимым ставкам депозита наличными

Ручные тележки — окончание рассмотрения решения о том, что отмена приказа AD о ручных тележках из Китая может привести к продолжению или повторению материального ущерба в разумно обозримом времени

Газонокосилки — планирование заключительного этапа расследований травм, полученных при травмах и / или сердечно-сосудистых травм у газонокосилок из Китая и Вьетнама, слушание запланировано на 18 мая, предварительные записки — к 11 мая, записки после слушания — до 25 мая, а окончательные комментарии — до 11 июня

Макаронные изделия — отмена административного рассмотрения приказа AD в отношении макаронных изделий из Италии на период с 1 июля 2019 г. по 30 июня 2020 г. в отношении двух респондентов и указание CBP оценить пошлины AD на ввоз таких товаров на применимые ставки депозита наличными

Купить мужские классические часы Glycine Airman 18 GMT GL0231- Ashford.com

Магазин не будет работать корректно, если куки отключены.

Похоже, в вашем браузере отключен JavaScript. Для наилучшего взаимодействия с нашим сайтом обязательно включите Javascript в своем браузере.

Артикул: GL0231

Сделано в Швейцарии
Движение: Автоматический
Ширина корпуса: 39 мм
Водонепроницаемость: 200 м (660 футов)
Особенности: GMT, GMT — часовая стрелка вращается каждые 12 часов, стрелка GMT — каждые 24 часа

Розничная торговля: 2670 долларов.00

Вы экономите: 74%

Специальная цена 695,00 долл. США

Распродано

Бесплатная стандартная доставка в континентальные США

Характеристики
GMT
GMT — Часовая стрелка вращается каждые 12 часов Стрелка GMT вращается каждые 24 часа
Подробнее о продукте
Фирменное наименование:	Глицин
Коллекция:	Летчик 18 GMT
Страна производитель:	Швейцария
Группа
Цвет ремешка:	Коричневый
Материал ремешка:	Кожа
Тип ремешка:	Ремешок
Длина ремешка:	8 дюймов
Ширина ремешка:	20 мм

Корпус
Ширина корпуса:	39 мм
Глубина корпуса:	10 мм
Кристалл:	Устойчивое к царапинам сапфировое стекло
Материал:	Нержавеющая сталь
Форма:	Круглый
Водонепроницаемость:	200 м (660 футов)
Механизм
Калибр:	GL293-GMT
Страна происхождения:	Сделано в Швейцарии
Корона:	Завинчивающаяся корона
Камней:	25
Тип:	Швейцарский Механический Автоматический (с автоподзаводом)

ГАРАНТИЯ

30-дневная гарантия возврата денег

Не на 100% удовлетворены своей покупкой? Не беспокойтесь — просто отправьте товар обратно в Эшфорд в новом, неношеном состоянии в течение 30 дней с момента доставки, и Эшфорд будет рад предоставить либо полный возврат покупной цены, либо кредит магазина на обмен.

ОБРАТИТЕ ВНИМАНИЕ:

— Товары, отправленные на любой адрес за пределами США, считаются окончательной продажей и не могут быть возвращены.

— Ashford возместит только стоимость возвращаемого или обмененного предмета; любые сборы за доставку от первоначальной покупки не будут возвращены.

— Покупатель несет ответственность за обратную доставку.

Для получения полной информации о нашей политике возврата и инструкциях щелкните здесь

РЕМОНТ

Для получения услуг по ремонту, пожалуйста, свяжитесь с нашим отделом ремонта по телефону 1-866-ASHFORD (1-866-274-3673) или по электронной почте в службу поддержки клиентов @ Эшфорд.ком

По вопросам ремонта обращайтесь в наш отдел ремонта по телефону 1-866-ASHFORD (1-866-274-3673) или по электронной почте по адресу [email protected]

Пункт назначения	Доступные опции	Цена
Континентальный США	Наземный транспорт	БЕСПЛАТНО для заказов от $ 99
Континентальный США	Наземный транспорт	$ 5.99 для заказов до 99
Континентальный США	Второй день в эфире	$ 19.95
Континентальный США	Next Day Air	$ 29.95
Гавайи / Аляска / Пуэрто-Рико	Второй день в эфире	$ 24.95
Гавайи / Аляска / Пуэрто-Рико	Next Day Air	$ 29.95
Канада	Стандарт ИБП	$ 14.95
Китай	UCS	$ 29.95
	Встреча у VIP-консьержа Ashford Hong Kong	БЕСПЛАТНО
	SF Экспресс	$ 29.95
	ИБП Экспресс	$ 29.95
Гонконг	Экспресс	$ 29.95
Гонконг	Встреча в Эшфорде, Гонконг VIP-консьерж	БЕСПЛАТНО
Тайвань	Экспресс	29 долларов.95
Япония	Экспресс	$ 29.95
Австралия	Экспресс	$ 29.95
Малайзия	Экспресс	$ 29.95
Сингапур	Экспресс	$ 29.95
Корея	Заказ ниже 150 долларов Ускоренный	$ 29.95
	Заказ свыше $ 150 Срочно	$ 9.99
	Заказ свыше $ 500 Ускоренный	Бесплатно
Вьетнам	Срочно	$ 59.95
Страны, не указанные в списке	Срочно	$ 59.95
Обратите внимание: доставка осуществляется через FedEx, UPS или USPS. Наше предложение по бесплатной доставке покрывает только расходы на доставку. Любые дополнительные сборы, такие как таможенные пошлины, оплачиваются заказчиком.Более подробную информацию о таких расходах см. В нашей таможенной информации ниже.

Функциональное взаимодействие путей глицинсинтаза-редуктазы и Вуда – Люнгдаля для автотрофного роста Clostridium drakei

Линейный путь Вуда – Люнгдаля (WLP) в анаэробных ацетогенах считается наиболее энергетически эффективным путем преобразования CO ₂ в формиат затем в ацетил-КоА.Благодаря этому преимуществу ацетогены считаются наиболее многообещающей промышленной платформой для производства биотоплива и химических товаров путем ферментации синтез-газа (1⇓⇓ – 4). Хотя состав генов и расположение WLP различаются в зависимости от ацетогенов, гены, кодирующие WLP, хорошо законсервированы, наряду с двумя генами, кодирующими частичную глицинсинтазу: H-белок системы расщепления глицина ( gcvH ) и дигидролипоилдегидрогеназа ( lpdA ). ) гены (5⇓⇓ – 8). Путь глицинсинтазы был первоначально предложен для использования CO ₂ в условиях автотрофного роста (2).В то время как эти два гена хорошо законсервированы в кластере генов, другие гены пути глицинсинтазы отсутствуют во многих геномах ацетогена, что вызывает вопросы относительно потенциальной функциональной роли этих ферментов в условиях автотрофного роста. После синтеза глицин может быть восстановлен до ацетилфосфата (ацетил-P), который, вероятно, будет преобразован в ацетат под действием ацетаткиназы ( ackA ), тем самым продуцируя один АТФ, называемый глицинсинтазоредуктазным путем (GSRP). Альтернативно, серингидроксиметилтрансфераза (SHMT) превращает продуцируемый глицин в серин, который затем превращается в пируват и биомассу (9⇓ – 11).Недавно искусственный метаболический путь, созданный с использованием глицинсинтазы и SHMT, названный восстановительным глициновым путем (RGP), показал способность фиксировать CO ₂ с использованием альтернативных доноров электронов (12, 13). Несмотря на общие реакции и присутствие генов, кодирующих частичную глицинсинтазу, функциональная роль пути в присутствии интактного WLP остается неопределенной.

В этом исследовании мы выяснили роль GSRP и RGP в чисто культивируемых Clostridium drakei SL1 ^T во время автотрофного роста.Первоначально сборка генома C. drakei показала сосуществование GSRP, RGP и WLP, которые затем были использованы для реконструкции метаболической модели в масштабе генома (GEM) для прогнозирования метаболического потока через основные углеродные пути. Впоследствии анализ транскриптома выявил активацию транскрипции генов, кодирующих пути; Затем это было подтверждено с помощью экспериментов по отслеживанию метаболитов на основе изотопа ¹³ C, биохимических анализов и генной инженерии.На основе объединения данных мы пришли к выводу, что C. drakei сочетает GSRP, RGP и WLP для фиксации CO ₂, а затем преобразует его в ацетил-КоА или ацетат во время автотрофного роста.

Результаты

Гены и метаболические пути фиксации углерода в геноме

C. drakei .
Геном C. drakei был собран полностью, в результате чего был получен полный геном размером 5,7 Мбит / с с содержанием GC 29,7% ( SI Приложение , рис.S1 и S2 и наборы данных S1 и S2) (14). После сборки мы идентифицировали 5144 гена, которые состояли из 5024 кодирующих последовательностей, 30 рибосомных РНК и 90 транспортных РНК (набор данных S3; подробности см. В SI Приложение , Text S2 ). Геном C. drakei кодирует три гена формиатдегидрогеназы (FDH), один кластер генов WLP, один кластер генов АТФ-синтазы и один кластер генов CO-дегидрогеназы (CODH) (рис.1 A и набор данных S3) (15, 16). Третий FDH (B9W14_20090) был расположен ниже генов, кодирующих гидрогеназу и NAD (P) H, что указывает на сходный геномный состав с таковым у Clostridium autoethanogenum , который, как сообщалось, восстанавливает формиат с использованием заряженного ферредоксина (Fd) и NAD. (P) H (17).Был идентифицирован единый кластер генов WLP, состоящий из 15 генов, связанных с карбонильной и метильной ветвями, что идентично генному составу у видов Clostridium (рис. 1 B ; см. Приложение SI , текст S3 для подробностей) (6, 7). Системы сохранения энергии играют важную роль в автотрофном росте ацетогенов, управляя необходимой восстановительной мощностью для реакций WLP и генерируя АТФ (18, 19). В г.Были идентифицированы геном drakei , гидрогеназный комплекс, Fd – NAD ⁺ оксидоредуктазный комплекс (Rnf), АТФ-синтазный комплекс, электронно-переносящий флавопротеин (ETF) и кластеры генов, кодирующих электрон-бифурцирующую трансгидрогеназу (Nfn), которые аналогичны тем в C. autoethanogenum и Clostridium ljungdahlii (Рис. 1 B и SI Приложение , Рис. S3; подробности см. в SI Приложение , Текст S4 ).
Рис. 1.
Сравнительный анализ автотрофных метаболических путей C.Драконова . ( A ) Сравнение белков, связанных с путем Вуда – Люнгдаля и системой сохранения энергии между C. drakei и 14 ацетогенными бактериями. Белки в C. drakei устанавливаются в качестве эталонов и анализируются с использованием инструмента поиска базового локального выравнивания (BLAST). Оценка сходства окрашена в соответствии с указанием на цветовом ключе, а отсутствие целевого белка окрашено в темно-серый цвет. ( B ) Кластер генов пути Вуда-Люнгдаля и расположение кластеров генов глицинсинтазы и глицинсинтазы-редуктазы в ацетогенах.На основании филогенетического расстояния кластеры генов в ацетогенах сравнивали, и значительное сходство между штаммами показано серой линией ( E — пороговое значение 10E-5). Гены обозначены стрелкой и окрашены в соответствии с функцией. Границы между генами или кластерами показаны пунктирными линиями. А, Acetobacterium ; Ac, , ацетогалобий, ; C, Clostridium ; E, Eubacterium ; M, Moorella ; P, Peptoclostridium ; Т, Treponema ; Th, Thermacetogenium ; Thr, Thermoanaerobacter .
В геноме C. drakei кластер глицинсинтазы состоит из Т-белка системы расщепления глицина ( gcvT ) и двух субъединиц глициндегидрогеназы ( gcvPA и gcvPB и gcvPB ) вместе с pdA , которые расположены в кластере генов WLP (рис. 1 B и набор данных S3). Первые четыре реакции пути глицинсинтазы аналогичны метильной ветви WLP, превращая CO ₂ в метилен-THF (тетрагидрофолат), который затем образует глицин из метилен-THF и CO ₂ вместе с NADH и аммиаком. (20⇓ – 22).После синтазы GSRP и RGP превращают глицин в ацетил-P или серин, катализируемые глицинредуктазой или SHMT, соответственно, что является существенным различием между путями (рис. 2 A ). Для GSRP кластеры кодирующих генов глицинредуктазы состоят из шести генов: тиоредоксинредуктазы ( trxA и trxB ), которая отдает электроны от NADPH; селенопротеин-глицинредуктаза A ( grdA ), которая объединяет основные субъединицы и затем восстанавливает глицин из субъединиц trxAB ; глицинредуктаза B ( grdB ), которая связывается с α-углеродом глицина; и глицинредуктаза C ( grdC и grdD ), которая принимает ацетиловые эфиры и затем фосфорилирует их в ацетил-P (рис.1 B и набор данных S3). Была исследована консервация глицинсинтазы и связанных с GSRP кластеров генов в других ацетогенах, выявлено только пять ацетогенов, содержащих интактную глицинсинтазу и кластеры GSRP (рис. 1 B ). Кроме того, для RGP, glyA , кодирующий SHMT, был расположен далеко от глицинсинтазы и кластеров генов GSRP (Dataset S3).
Рис. 2.
Построение модели метаболической сети в масштабе генома C. drakei ( i SL771).( A ) Распределение потока C. drakei , полученное из цепи Маркова Монте-Карло. Верхние прямоугольники представляют значение потока из гетеротрофного состояния. Нижние прямоугольники представляют значение потока из автотрофного состояния. ( B ) Распределение потоков CO ₂ — реакции, связанные с путем фиксации в штаммах дикого типа и штаммах с нокаутом. ( C ) Соотношение продукции ацетил-КоА в штаммах дикого типа и штаммах с нокаутом.
На основании этих анализов C.Согласно прогнозам, drakei преобразует CO ₂ в формиат через FDH, а затем в метилен-THF, используя первые четыре реакции метильной ветви WLP во время автотрофного роста. Впоследствии метилен-ТГФ расходится с образованием глицина или ацетил-КоА с использованием глицинсинтазы или остальных ферментов WLP соответственно. Затем образованный глицин превращается либо в серин, либо в ацетил-P через RGP или GSRP, соответственно (фиг. 2 B ). Хотя эти пути не консервативны для большинства ацетогенов, функциональность генов подтверждает, что эти пути могут использоваться во время автотрофного роста, что требует подтверждения.
Реконструкция метаболической сети в масштабе генома
C. drakei .
Чтобы предсказать функциональность метаболических путей, мы реконструировали GEM ( i SL771), который математически рассчитывает клеточный метаболизм в заданном состоянии ( SI Приложение , Рис. S4 A ; см. SI Приложение , Для получения подробной информации отправьте текст S5 ) (23⇓⇓ – 26). Модель i SL771 представляет собой метаболическую модель в масштабе ацетогенного генома с размером генома более 5.0 Mbp, который состоит из 771 гена, 922 реакций и 854 метаболитов. После реконструкции модель i SL771 была затем экспериментально подтверждена на функциональную способность к росту и скорости продукции в гетеротрофных условиях с использованием фруктозы и автотрофных условиях с использованием H ₂ / CO ₂. Экспериментальная и смоделированная скорости роста составляли 0,184 и 0,178 ч ^-1 для условия фруктозы и 0,044 и 0,046 ч ^-1 для условия H ₂ / CO ₂, соответственно ( SI Приложение , рис.S4 B ). Соответствующие экспериментальные и смоделированные скорости производства ацетата составляли 4,524 и 4,490 ммоль⋅г сухой массы (gDW) ^-1 h ^-1 и 3,278 и 3,291 ммоль⋅gDW ^-1 ⋅h ^-1 для фруктозы. и условия H ₂ / CO ₂ соответственно ( SI Приложение , рис. S4 B ). Сравнение экспериментальных данных и данных in silico показывает, что модель достаточно точно предсказывала рост и производительность при обоих условиях.
Затем, состояния метаболического потока в масштабе генома C. drakei в условиях роста были предсказаны с помощью GEM i SL771 и выборки методом Монте-Карло цепи Маркова со 100 000 точек выборки (набор данных S4) (27–29) . Согласно полученным значениям потока, поток глюконеогенеза вытеснил поток гликолита в условиях H ₂ / CO ₂, наблюдая начальное увеличенное значение потока реакций от ацетил-КоА к пирувату, а затем к фосфоенолпирувату и 3-фосфоглицерину. кислота (рис.2 A и набор данных S4). Кроме того, предсказанный поток WLP был активен в присутствии как фруктозы, так и H ₂ / CO ₂, с более высокими потоками WLP в условиях H ₂ / CO ₂ по меньшей мере в два раза. До путей GSRP и RGP распределение потока глицинсинтазы в условиях H ₂ / CO ₂ составляло 2,09, что отличалось от предыдущих реакций, то есть первых четырех реакций, связанных с WLP (рис. 2 A и набор данных S4).Для GSRP в условиях роста H ₂ / CO ₂ глицин превращался в ацетил-P с распределением потока 1,98, превышающим значение в условиях фруктозы (0,55). Для RGP глицин был преобразован в серин с использованием SHMT, кодируемого glyA с распределением потока 0,10, а затем в пируват, катализируемый сериндегидратазой, кодируемой sda с распределением потока 0,04 (рис. 2 A и Набор данных S4). Потоки реакций RGP и GSRP потенциально производят пируват посредством фиксации CO ₂ без использования реакции por с использованием Fd, что снижает использование восстанавливающей способности.В целом, анализ in silico показал, что C. drakei сочетает WLP, GSRP и RGP для фиксации CO ₂ в ацетил-CoA, ацетил-P или серин, соответственно (рис. 2 A ).
После определения распределения потока была исследована каждая реакция, связанная с путями связывания CO ₂. Среди семи реакций WLP ограничение потоков первых пяти реакций критически повлияло на рост модели, указывая на то, что реакции потенциально необходимы для роста деформации в автотрофных условиях ( SI Приложение , рис.S4 C ). Интересно, что ограничение реакции моноксиддегидрогеназы / ацетил-КоА-синтазы (CODH / ACS), которая играет важную роль в синтезе ацетил-КоА, не подавляло рост модели, предлагая альтернативный путь, который мог бы заменить роль Реакция CODH / ACS ( SI Приложение , рис. S4 C ). Чтобы определить альтернативную реакцию, было исследовано распределение потока глицинредуктазы (GLYR), которая синтезирует ацетил-P, а затем потенциально ацетил-CoA, с результатом, аналогичным реакции потока CODH / ACS, ограничения потока GLYR, который не влиял рост модели ( СИ приложение , рис.S4 C ). Несмотря на то, что реакции неэффективны для роста, CODH / ACS и GLYR показали обратно коррелированные значения потока, что указывает на то, что две реакции уравновешивают потоки для поддержания биомассы путем изменения маршрута в отсутствие одной реакции ( SI Приложение , Рис. S4 D ) .
Чтобы предсказать возможность путей глицинсинтазы во время фиксации CO ₂ в отсутствие WLP, мы модифицировали модель, удалив CODH / ACS (ΔCODH / ACS), GLYR (ΔGLYR) или глицинсинтазу (ΔGLYS). ) реакции и сравнил ее с моделью i SL771 дикого типа (WT), в результате чего было предсказано, что удаление двух реакций одновременно не приведет к росту in silico.По сравнению с WT, потоки первых четырех реакций WLP в модели ΔGLYR были относительно схожими, а потоки трех последних реакций WLP были увеличены (рис. 2 B ). Точно так же модель ΔGLYS предсказывала увеличение трех последних реакций, но первые четыре реакции были уменьшены по сравнению с WT (набор данных S4). В модели ΔGLYS три потока последних реакций WLP были увеличены из-за отсутствия альтернативного маршрута и максимизации потоков WLP. В модели ΔCODH / ACS, по сравнению с WT, первые четыре реакционных потока WLP были увеличены, но последние реакционные потоки были незначительными (рис.2 В ). Кроме того, модель ΔCODH / ACS максимизировала первые четыре потока и ограничивала последние реакции, чтобы избежать тупикового пути, что приводило к увеличению потоков реакций GLYS и GLYR для изменения маршрута метаболизма. Кроме того, путь производства ацетил-КоА варьировался в зависимости от построенных моделей. В WT продукцию ацетил-КоА приписывали CODH / ACS и pta , который в последнем случае превращает ацетил-P, синтезированный через GLYR, в ацетил-КоА (рис. 2 C ). На основе результатов моделирования было предсказано, что модель ΔCODH / ACS и модель ΔGLYR будут производить ацетил-CoA путем перенаправления потоков на pta и реакции CODH / ACS (рис.2 С ). Кроме того, предполагается, что GLYR и RGP в автотрофных условиях могут синтезировать ацетил-P или пируват, что поднимает дополнительный вопрос о том, функционируют ли эти пути in vivo.
Транскрипционный ответ
C. drakei в автотрофных условиях.
Чтобы подтвердить предсказание in silico, мы измерили транскриптомные изменения, вызванные гетеротрофными и автотрофными условиями, используя RNA-seq (секвенирование) ( SI Приложение , рис.S5 и S6 и набор данных S5; подробности см. в приложении SI , текст , текст S6 ). После экспериментов с последовательностью РНК анализ дифференциально экспрессируемых генов (DEG) выявил 693 гена с повышенной и 651 подавляющей регуляции ( SI Приложение , рис. S7 и наборы данных S6 и S7) (30). Экспрессия генов, кодирующих FDH и WLP, была значительно повышена в условиях H ₂ / CO ₂ (фиг. 3 A ). Из трех FDH первая (B9W14_06825) и третья (B9W14_20090) транскрипционно активировались с изменением кратности 3.02 и 4.04 (скорректированное значение P для результатов пакета DESeq2; DESeq P <7,10 × 10 ⁻³⁶) соответственно. Минимальное кратное изменение в 5,10 (DESeq P <1,26 × 10 ⁻⁹²) для hytE (B9W14_20070), расположенного выше третьего FDH (B9W14_20090), предполагает, что FDH использует близлежащие гены гидрогеназы (B9W14_2006085 – B9W14_ преобразовать CO ₂ в формиат (Рис. 3 A , SI Приложение , Рис. S8 и Наборы данных S8 и S9).Все гены, связанные с карбонильной ветвью WLP, были активированы с минимальным кратным изменением 1,86 (DESeq P <2,81 × 10 ^-12) для cooC (B9W14_22305). Для метильной ветви WLP все гены были значительно активированы с минимальным кратным изменением 2,14 (DESeq P <5,04 × 10 ^-13) для fhs (B9W14_22300). В соответствии с уровнями экспрессии генов, кодирующих WLP, транскрипционная распространенность гена, кодирующего глицинсинтазу (B9W14_22245), который был локализован в кластере генов WLP, увеличивалась на 2.52 (DESeq P <5,02 × 10 ⁻¹⁹).
Рис. 3.
Экспериментальная проверка пути глицинсинтаза-редуктаза. ( A ) Изменения транскрипции пути Вуда-Люнгдала, пути глицинсинтаза-редуктаза и пути восстановительного глицина при гетеротрофном росте и автотрофном росте у C. drakei . Стек состоит из трех коробок; верхний и средний прямоугольники представляют собой нормализованные чтения РНК из гетеротрофных и автотрофных условий соответственно.Нижнее поле указывает на кратное изменение как автотрофное выражение по сравнению с гетеротрофным. Звездочки обозначают незначительное изменение соответствующего гена. ( B ) Обзор продукции глицина и серина с использованием фруктозы или CO ₂ в качестве источника углерода через путь Вуда-Люнгдаля, путь глицинсинтаза-редуктазы, путь восстановительного глицина и путь гликолита. ( C ) ¹³ Эксперимент по отслеживанию метаболитов С-метки для проверки пути глицинсинтаза-редуктаза.«H» представляет образцы, полученные из [U- ¹³ C] фруктозы, а «A» представляет образцы, полученные из ¹³ CO ₂. Темно-синие цветные полосы показывают спектры немеченого углерода; светло-коричневым цветом обозначены спектры [¹³ C] фруктозы и [¹³ C] CO ₂. ( D ) Относительные меченые и немеченые фракции глицина и серина в образцах, полученных в автотрофном состоянии по сравнению с гетеротрофным. Планки погрешностей показывают SD ( n = 3).( E ) Активность тиоредоксинредуктазы измеряли с использованием лизата, экстрагированного из C. drakei , который культивировали в гетеротрофных (H) и автотрофных (A) условиях в трех биологических повторностях. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение ( n = 6). Расчет единицы описан в SI Приложение , Материалы и методы . Звездочки обозначают значительное изменение соответствующих генов (** P <0,01).
Примечательно, что мы наблюдали, что уровни транскрипции GSRP-ассоциированных генов были значительно повышены в состоянии H ₂ / CO ₂ (набор данных S6).Для глицинсинтазы все связанные гены были активированы с минимальным изменением в 1,87 раза (DESeq P <3,25 × 10 ^-13) для gcvT вместе с экспрессией генов gcvH и . lpdA , расположенный в кластере WLP, с минимальным кратным изменением 2,52 и 2,55 (DESeq P <1,41 × 10 ⁻¹⁵), соответственно (рис. 3 A и наборы данных S8 и S10). Более того, экспрессия генов второго и третьего кластеров GLYR (B9W14_09375–09410 и B9W14_09465–09495) была значительно повышена с минимальным изменением в 7 раз.48 (DESeq P <1,88 × 10 ⁻⁴¹) и 5,08 (DESeq P <3,24 × 10 ⁻¹³) для grdC (B9W14_09490) и grdD (B9W14_09410) соответственно. В первом кластере GLYR (B9W14_00350–00380) транскрипционно активируются пять генов, а остальные три гена остаются неизменными. Взятые вместе, результаты анализа DEG показали, что C. drakei транскрипционно активирует кластер WLP вместе с GSRP-ассоциированными генами, указывая на то, что фиксированный CO ₂ превратился в ацетил-CoA с использованием WLP, тогда как синтезированный глицин через GSRP, вероятно, восстанавливается до ацетил-P в автотрофных условиях.
¹³ Эксперимент с маркировкой C подтвердил активацию метаболического потока синтеза глицина в условиях автотрофного роста.
На основании анализа in silico и транскрипционного анализа, C. drakei , как ожидается, будет сочетать WLP и GSRP для фиксации CO ₂. Чтобы подтвердить функциональное включение двух путей, мы исследовали путь ¹³ C количественно, используя [U- ¹³ C] фруктозу или ¹³ CO ₂ в качестве источника углерода (рис.3 В ). [U- ¹³ C] Добавленный фруктозой C. drakei показал 100% долю немеченого углерода для глицина (фиг. 3 C ). Базальная среда для C. drakei содержала 2 г / л дрожжевого экстракта, необходимого для размножения бактерии. Возможно, присутствие дрожжевого экстракта дополняло немеченые аминокислоты C. drakei , что приводило к немеченому глицину в гетеротрофном состоянии.
Напротив, 47.Было помечено 3% обнаруженного серина, что свидетельствует о том, что C. drakei активно биосинтезирует серин в присутствии фруктозы (фиг. 3 C ). В C. drakei серин можно синтезировать из глицинсинтазы или гликолитического пути путем превращения 3-фосфоглицерата в 3-фосфогидроксипируват, а затем, наконец, в серин. При наличии ряда заряженных атомов углерода синтез серина, вероятно, происходит из гликолитического пути, в котором используется [U-¹³ C] фруктоза, а не из глицина, который не был помечен (рис.3 С ). Напротив, меченый глицин наблюдали в присутствии ¹³ CO ₂, демонстрируя, что C. drakei генерирует глицин с использованием глицинсинтазы (фиг. 3 C ). Впоследствии направление глицина было проверено путем исследования мечения серина ¹³ C, которое продемонстрировало, что было помечено 7,8% серина, что намного ниже, чем в гетеротрофном состоянии. Кроме того, изменение глицина по сравнению с серином в штамме в автотрофных условиях составило 4 раза.48, выше, чем изменение, обнаруженное в гетеротрофных условиях с 1,25-кратным изменением (рис. 3 D ). Уменьшение доли меченого серина и отношения глицина к серину указывает на то, что синтез серина может быть ограничен в автотрофном состоянии. Взятые вместе, в соответствии с предсказанием метаболической сети в масштабе генома, результаты эксперимента по C-мечению ¹³ продемонстрировали, что реакция глицинсинтазы фиксирует CO ₂ и синтезирует глицин.
Путь глицинредуктазы превращает синтезированный глицин в ацетил-P.
Эксперименты ¹³ C-мечения подтвердили роль глицинсинтазы; однако нисходящее направление глицина во время автотрофного роста оставалось неясным. Для GSRP активность тиоредоксинредуктазы играет важную роль в восстановлении глицина. Мы предположили, что если активность тиоредоксинредуктазы в автотрофно выращенных клетках увеличится по сравнению с таковой в гетеротрофных условиях, будет доступно больше тиоредоксина для потенциального восстановления глицина до ацетил-P, как показано в результатах RNA-seq.Чтобы проверить эту гипотезу, активность тиоредоксинредуктазы в клетках, выращенных в обоих условиях, была измерена с помощью колориметрического анализа, в результате чего средние единицы активности составили 3,76 × 10 ^-3 и 2,82 × 10 ^-2 для фруктозы и H _2. / CO ₂ соответственно. Этот результат демонстрирует значительную разницу между двумя условиями при минимальном изменении в четыре раза ( P = 1,3 × 10 ⁻³) (рис. 3 E ). Взятые вместе, результаты подтвердили, что C.drakei активирует не только WLP, но также GSRP в условиях автотрофного роста, а затем использует тиоредоксин для восстановления глицина до ацетил-P, а не серина.
Путь глицинредуктазы увеличивает скорость потребления CO
₂ в условиях автотрофного роста.
Несмотря на подтверждения, фенотипический эффект сосуществования путей остается неясным. Для подтверждения функциональной роли пути требуется реконструкция C. drakei для модификации путей, чтобы подтвердить предыдущий результат, но, к сожалению, разработка инструмента генетической модификации для штамма была неосуществимой.В качестве альтернативы генетически модифицируемый ацетоген, штамм Eubacterium limosum ATCC 8486 с отсутствием в геноме GSRP-кодирующих генов, исследовали на гетерогенное внедрение пути (8, 31). Чтобы подтвердить функциональную роль, кластер генов, кодирующих GSRP из генома C. drakei , был клонирован в плазмиду, которая затем была введена в E. limosum (штамм GSRP), и тот же остов плазмиды без гена кластер был введен в E.limosum в качестве контрольного штамма ( SI Приложение , рис. S9 A ). Используя контроль и штамм GSRP, измеряли профили роста, потребления и продукции, чтобы понять влияние пути в присутствии WLP. Согласно профилю роста максимальная плотность клеток контрольного штамма и штамма GSRP составляла 0,241 и 0,243, соответственно, что указывает на то, что введение GSRP не увеличивает максимальную биомассу, продуцируемую в этих условиях (фиг. 4 A ).Точно так же разница в общем потреблении H ₂ и CO ₂ между штаммами была незначительной, как и количество ацетата, продуцируемого штаммами (фиг. 4 B — D ).
Рис. 4.
Фенотипический эффект пути глицинсинтаза-редуктаза. Для сравнения фенотипических изменений гены, кодирующие путь глицинсинтаза-редуктаза из C. drakei , были введены в E. limosum , который затем культивировали в условиях автотрофного роста.( A — D ) Плотность клеток ( A ), потребление H ₂ ( B ), потребление CO ₂ ( C ) и производство ацетата ( D ) из E ..limosum с генами, кодирующими глицинсинтаза-редуктазный путь (GSRP) и без генов (контроль), измеряли во время автотрофного роста. ( E — G ) Скорость роста ( E ), скорость потребления H ₂ и CO ₂ ( F ) и скорость продуцирования ацетата ( G ) штаммами контроля и GSRP были в сравнении.( H ) Сравнивали экспрессию генов метильных и карбонильных ветвей пути Вуда – Люнгдаля у обоих штаммов. На всех панелях темно-синие столбцы указывают на результаты, полученные для контрольного штамма, а оранжевые столбцы указывают на результаты, полученные для штамма GSRP. Все планки погрешностей на панелях представляют стандартное отклонение ( n = 3).
Несмотря на аналогичную продукцию биомассы, скорость роста штамма GSRP была выше, чем у контрольного штамма, со скоростью роста 0,00719 и 0.00523 h ⁻¹ соответственно (рис.4 E ). Подобно темпам роста, скорости потребления H ₂ и CO ₂ штаммом GSRP составляли 2,291 и 0,276 ммоль⋅гDW ^-1 ч ^-1, соответственно, что было намного выше, чем потребление скорости 0.943 и 0.191 ммоль⋅gDW ⁻¹ ⋅h ⁻¹ по контрольному штамму, соответственно (рис. 4 F ). В соответствии с результатами, скорость продукции ацетата штаммом GSRP была выше, чем скорость контрольного штамма, с 1.191 и 0,559 ммоль⋅gDW ⁻¹ ⋅h ⁻¹ соответственно (рис.4 G ). Для подтверждения результата экспрессию генов, кодирующих GSRP и WLP, в штаммах измеряли с помощью qRT-PCR. Как и ожидалось, экспрессия гена GSRP наблюдалась только в штамме GSRP, а не в контрольном штамме, что указывает на то, что гены, кодирующие GSRP, были транскрипционно активными в условиях автотрофного роста ( SI Приложение , рис. S9 B ). Кроме того, экспрессия гена WLP в контрольном штамме была транскрипционно более активной, чем в штамме GSRP (рис.4 F ), вероятно, из-за отсутствия генов, кодирующих GSRP, что приводит к большей энергии, доступной для экспрессии гена WLP ( SI Приложение , рис. S9 C ).
Вместе взятые, хотя GSRP не повлиял на способность автотрофного роста ацетогена, с дополнительным путем фиксации CO ₂ введение пути увеличило скорость потребления CO ₂ и H ₂, что привело к увеличение скорости производства ацетата, который обеспечивает доступную энергию для клетки, что в конечном итоге изменяет скорость роста ацетогена.
Discussion
Среди филогенетически и физиологически разнообразных ацетогенов некоторые содержат GSRP и RGP, соединенные с WLP (6, 22, 32). Несмотря на совместное использование первых четырех реакций, связывание WLP с GSRP и RGP в ацетогенах для фиксации соединений C1 остается неизвестным. В этом исследовании, чтобы гарантировать функциональную роль GSRP и RGP в условиях автотрофного роста, модель метаболической сети в масштабе генома i SL771 была реконструирована и предсказала значения метаболического потока реакций от метилен-ТГФ до глицина до ацетил- P вместе со всеми реакциями WLP.Кроме того, транскриптомный анализ, эксперименты по отслеживанию метаболитов С-метки ¹³, измерения биохимической активности и гетерологичная экспрессия генов, кодирующих GSRP, дополнительно показали, что GSRP в автотрофном состоянии был полностью функциональным в присутствии WLP.
С точки зрения энергосбережения, аналогично WLP, GSRP получает АТФ, превращая ацетил-P в ацетат, тем самым возвращая АТФ, вложенный в начало пути. Предполагается, что для создания химического градиента, который приводит к синтезу АТФ, GSRP будет менее эффективным, чем WLP, из-за обхода метилен-THF, который перемещает ионы через мембрану, что приводит к созданию более низкого химического градиента (33).Однако GSRP помогает поддерживать организм даже при низком восстановительном потенциале, таком как фиксация CO ₂ в среде с низким содержанием АТФ, во время реакции ацетогенеза в автотрофных условиях (2). WLP и GSRP используют аналогичные электронные носители, но дополнительный уменьшенный Fd для WLP и NADPH используется для GSRP. Сравнивая разность восстановительной мощности, НАДФН имеет более высокий окислительно-восстановительный потенциал, чем восстановленный Fd, что указывает на то, что в условиях ограниченного доступного восстановленного Fd штамм, вероятно, будет задействовать GSRP для фиксации CO ₂.Еще одним преимуществом использования идентифицированных путей является синтез пирувата с использованием RGP. Для получения пирувата обычный WLP катализирует por с использованием восстановленного Fd, но RGP обходит использование восстановления и превращает серин в пируват. В целом, мы предположили, что C. drakei уравновешивает потенциал восстановления, который имеет решающее значение во время автотрофного роста, путем сочетания WLP, GSRP и RGP, которые были рассчитаны с помощью анализа in silico и RNA-seq.
Кроме того, чтобы сбалансировать мощность восстановления, в геноме были идентифицированы кластеры генов, кодирующих Nfn-, ETF-, Rnf- и АТФ-синтазу, которые отвечают за сохранение энергии в C.Драконова . Среди них комплекс Nfn, который использует восстановленный Fd для восстановления NADP ⁺, показал изобилие транскрипции во время автотрофного роста (Dataset S9). Этот результат согласуется с предыдущим сообщением о том, что мутация комплекса Nfn в C. autoethanogenum задерживает рост в автотрофных условиях (34). НАДФН, образующийся из комплекса, вероятно, восстанавливает тиоредоксин для взаимодействия с глицинредуктазой у C. drakei . Кроме того, среди всех ETF транскрипционно активировался только связанный с лактатдегидрогеназой (LDH) ETF, который восстанавливает окисленный Fd из NADH (Dataset S9).Неясно, почему экспрессия гена увеличилась, несмотря на отсутствие лактата. Одно из предположений состоит в том, что ацетоген способен к бифуркации различных метаболитов с использованием комплекса ЛДГ, предполагая, что в присутствии энергодефицитных условий кластер транскрипционно активируется для получения электронов от других метаболитов (35). Соответственно, упомянутые белки, связанные с энергосбережением, жизненно важны в средах с нулевым чистым накоплением АТФ для уравновешивания окислительно-восстановительных пар для выработки энергии.
Примечательно, что среди семи кластеров гидрогеназы два были значительно активированы.До проведения транскрипционного анализа предполагалось, что в присутствии высокого уровня водорода большинство гидрогеназ будет активировано для использования доступного водорода. Однако другие пять гидрогеназ показали низкие уровни экспрессии генов в обоих условиях, что указывает на то, что они не могут окислять водород в автотрофных условиях. Из трех кластеров FDH только два были активированы, тогда как мембраносвязанная водород-продуцирующая формиат-гидролаза оставалась неизменной. Точно так же все другие гены, кодирующие гидрогеназу, которые были локализованы в кластере генов, кодирующих формиат-гидрогенлиазу, были неактивны в автотрофных условиях, что указывает на то, что гидрогеназы специфически взаимодействуют с другими ферментами поблизости.Более того, ген, кодирующий оксидоредуктазу, отсутствовал в первом кластере FDH, что поставило вопрос о том, как белок принимает электроны. Однако ожидалось, что транскрипционно активированная селено-зависимая FDH, которая связывается NADPH-восстанавливающей гидрогеназой, будет проявлять более высокую каталитическую активность, чем FDH без селеноцистеина (36). Основываясь на этих результатах, C. drakei содержит сложную систему сохранения энергии для функционального использования путей фиксации CO ₂ путем уравновешивания различных электронных носителей и введения GSRP C.drakei увеличил потребление соединения C1 и скорость роста других ацетогенов.
Хотя экспериментальные данные по отслеживанию метаболитов С-метки ¹³ подтверждают синтез глицина из CO ₂ с использованием путей, снижение доли немеченого глицина улучшило бы качество данных и убедительно подтвердило бы предлагаемый вывод, который требует независимый от дрожжевого экстракта штамм C.
No related posts.

Препарат, улучшающий метаболизм головного мозга

Доппельгерц® актив Глицин+В-Витамины

Глицин форте с витаминами №30 (таб)

Чем полезен глицин и как его принимать: малоизвестные факты о глицине

№1 Помогает предотвратить старение

№2 Укрепляет мышцы

№3 Повышает эластичность кожи и укрепляет кости, связки и хрящи

№4 Глицин для сна

№5 Глицин от похмелья

№6 Помогает предотвратить болезни сердечно-сосудистой системы

№7 Глицин для памяти, улучшения умственных способностей и психоэмоционального состояния

инструкция, применение, аналоги препарата, состав, показания, противопоказания, побочные действия в справочнике лекарств от УНИАН

Применение Глицина

Глицин — состав и форма выпуска препарата

Глицин — как принимать препарат

Глицин — противопоказания, побочные эффекты

Аналоги Глицина

срок годности и условия хранения

Срок годности Глицина

Можно ли использовать препарат, если срок заканчивается за 5-10 дней?

Срок годности до и после вскрытия препарата. Есть ли разница?

Что происходит с лекарством со временем?

Как выявить просроченный препарат?

Можно ли использовать просроченный препарат?

Как хранить Глицин?

Препараты-аналоги

Заключение

Глициния — уход и выращивание древовидной лианы

Виды растения

Посадка лианы

Как правильно ухаживать

Обрезка

Как лучше подкармливать

Размножение семенами

Размножение отводками

Польза для здоровья, побочные эффекты, применение, дозы и меры предосторожности

Новинка — глицин ELISA — Rocky Mountain Diagnostics

О глицине

Характеристики анализа

Для получения дополнительной информации:

:: Глицин из Индии и Китайской Народной Республики: приказы о компенсационных пошлинах

Фон

Объем заказов

Приказы о компенсационных пошлинах

Приостановление ликвидации

Ориентировочные ставки субсидий

Временные меры

Уведомления для заинтересованных сторон

Приложение

Объем заказов

| Abcam

Наш протокол вестерн-блоттинга включает растворы и реагенты, процедуры и полезные ссылки, которые помогут вам в ходе эксперимента.

AD / CV Новости: концевые блоки, глицин, ручные тележки, газонокосилки, макаронные изделия

Купить мужские классические часы Glycine Airman 18 GMT GL0231- Ashford.com

Артикул: GL0231

Характеристики

Подробнее о продукте

Группа

Корпус

Механизм

ГАРАНТИЯ

Функциональное взаимодействие путей глицинсинтаза-редуктазы и Вуда – Люнгдаля для автотрофного роста Clostridium drakei

Результаты

Гены и метаболические пути фиксации углерода в геноме

Реконструкция метаболической сети в масштабе генома

Транскрипционный ответ

Путь глицинредуктазы превращает синтезированный глицин в ацетил-P.

Путь глицинредуктазы увеличивает скорость потребления CO

Discussion

Добавить комментарий Отменить ответ